ヒストンメチル化酵素複合体による転写抑制機構の分子基盤

组蛋白甲基转移酶复合物转录抑制机制的分子基础

基本信息

批准号：
20052012
负责人：
立花誠
金额：
$ 3.97万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2009
项目状态：
已结题

项目摘要

1. 変異型G9a/GLP発現マウスの樹立G9aあるいはGLPの活性に必須のアミノ酸を置換するように遺伝子をノックインしたキメラマウスを野生型と交配することで変異型G9a及びGLP発現マウスのへテロ接合型を得ることが出来た。2. 変異型G9a/GLP酵素複合体発現マウスの表現型解析変異型G9aのノックインマウスは胎生致死であった。さらに詳細にステージングを行って致死性を解析した結果、G9aのシンプルノックアウトよりは若干生存する期間が長くなるものの(胎生約11日まで生育可能)、胎児の成長遅延などの表現型は維持されていた。さらにこのノックインマウスではヒストンのメチル化の低下、および標的遺伝子の転写抑制が解除される表現型はシンプルノックアウトと同一であった。一方で、変異型GLPのノックインマウスは発生に顕著な影響は観察されず、出生可能であった。さらに雌雄共に妊よう性に問題はなかった。変異型GLPノックインマウスでは、GLPシンプルノックアウトで観察されたような、ヒストンのメチル化の低下、および標的遺伝子の転写抑制が解除される表現型は観察されなかった。以上の結果から以下の結論が導き出された。a) G9aサブユニットはG9a/GLP複合体における触媒機能に重要な役割を有する。b) GLPサブユニットの酵素活性は本複合体の触媒機能に不要であった。GLPサブユニットの機能は触媒よりむしろ複合体の形成を調節することにあると考えられた。

1。通过敲打基因的配合嵌合小鼠来建立突变的G9A/GLP小鼠，以替代具有野生型，杂合形式的突变体G9A和表达GLP小鼠的G9A或GLP表达活性所必需的氨基酸。 2。表达突变体G9A/GLP酶复合物的小鼠的表型分析。用突变G9A的敲入小鼠对胚胎寿命具有致命性。进一步详细地，我们通过分期分析了致死性，并发现尽管生存期比简单的G9A敲除略长（它可以长大到胎儿生长约11天），但仍保持了诸如胎儿生长迟缓之类的表型。此外，在靶基因的组蛋白甲基化和转录抑制的表型与小鼠中简单敲除的表型相同。另一方面，在小鼠中未观察到突变GLP的显着影响，并且是可生有的。此外，男性和女性的生育能力都没有问题。在突变的GLP敲门小鼠中，未观察到表型，其中观察到靶基因的组蛋白甲基化降低和转录抑制作用，如GLP简单敲除所观察到的那样。以上结果导致以下结论：a）G9A亚基在G9A/GLP复合物中的催化功能中起重要作用。 b）该复合物的催化功能不需要GLP亚基的酶活性。 GLP亚基的功能被认为是调节复合物的形成而不是催化。