試験管内再構築系による、コアヒストンのリジンのメチル化と転写との関連評価

使用体外重建系统评估核心组蛋白赖氨酸甲基化与转录之间的关系

基本信息

批准号：
17054017
负责人：
立花誠
金额：
$ 2.56万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17054017/
关键词：
複合体クロマチンヒストンメチル化ヌクレオソーム転写

项目摘要

現在、ヒストンのどのリジン残基がメチル化修飾を受け、それがどういったエピジェネティックな情報をコードしているのかが解明されつつある。我々はヒストンH3のリジン9(H3-K9)をメチル化する酵素、G9aに関する研究を行ってきた。しかし、ヒストンのメチル化による転写抑制のメカニズムはまだ不明な点が多いところから、我々はヌクレオソームを基質とした試験管内転写系を再構成し、H3-K9のメチル化と転写の関連を分子レベルで調べようとしている。現在は、試験管内でヌクレオソームを再構成させるのに必要な因子群は揃え、実際に再構成検討に入っている段階である。さらに、ヒストンメチル化酵素の機能を解明すべく、G9a複合体の機能解析も行った。その結果、G9aとGLPが分子量の比率が野生型の細胞では1:1の複合体として存在していることを見出した。その結合様式はG9a/GLP共にC末のSET domainに依存的であることも分かった。以上のことから、G9aはGLPとの複合体として存在するときに限って生体内でピストンのメチル化酵素として機能しうる可能性が強く示唆された。さらに詳細に解析を進めたところ、G9aの酵素活性が生体内でのメチル化に重要であり、反してGLPの活性は無くても良いことがわかった。また、GLPはG9aのタンパク質安定化に寄与する分子であることも分った。

目前，通过甲基化可以理解史季的赖氨酸残基，以及它正在阐明哪种表观遗传信息。我们一直在对G9A进行研究，G9A是一种甲基化的H3 Lizin 9（H3-K9）的酶。然而，由于抑制病史甲基化的机制仍然未知，因此我们根据核小体重建了测试管中的转录系统，以及与H3-K9的甲基化和转录的关系。。当前，重新配置试管中核小体所需的因素是对齐的，实际上它们正在重新考虑。此外，为了阐明甲基化酶的功能，还进行了G9A复合物的功能分析。结果，我们发现野生型细胞中的G9A和GLP作为1：1复合物存在。还发现，绑定样式取决于C的C末端C末端C末端的固定域。从上面，强烈建议，只有在与GLP的复合物存在时，G9A只有在生物体内才能充当活塞甲基化酶。此外，详细的分析表明，G9a的酶活性对于活体中的甲基化很重要，相反，GLP活性不需要。它还表明GLP是有助于G9A蛋白稳定的分子。