ゲノムワイドな新規マラリアワクチン抗原探索ストラテジー

全基因组新型疟疾疫苗抗原发现策略

• 批准号: 19041053
• 负责人: 坪井 敬文
• 金额: $ 9.22万
• 依托单位: Ehime University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19041053/
• 关键词: マラリア; ワクチン; 感染症; バイオテクノロジー; ゲノム

熱帯熱マラリアゲノム情報が明らかとなった今、マラリア流行地の成人に防御抗体を誘導する原虫抗原を網羅的に同定することができれば、新規マラリアワクチン開発の突破口となると考えられている。しかし、大腸菌等既存の方法では熱帯熱マラリア原虫組換えタンパク質の網羅的な合成は非常に困難であったため、そのような試みはこれまで全く実施されてこなかった。そこで申請者らは、これまでの研究で原虫の組換えタンパク質合成への有用性が確認されていたコムギ胚芽無細胞タンパク質合成法を用いて、メロゾイト期の完全長cDNAライブラリーからプロテインアレイを作製し、少量のマラリア流行地住民血清で実施可能なハイスループットなワクチン候補抗原スクリーニング手法を開発することを目的に本研究を実施した。1. コムギ胚芽無細胞系を用いたハイスループットなビオチン化プロテインアレイの作製メロゾイト期原虫のプロテインアレイを作製するため、前年度に作製したcDNAクローンから、コムギ無細胞タンパク質合成法を改変してビオチン化組換えタンパク質をハイスループットに合成出来る系を用いて、ビオチン化組換えタンパク質の合成を行い、熱帯熱マラリア原虫メロゾイト期のタンパク質約100種類以上小スケールで合成した。2. アルファ・スクリーン法を用いた新規メロゾイト抗原のスクリーニング昨年度に確立した高感度、小スケール、ハイスループットな抗原抗体反応測定系を用いて、上記メロゾイト期タンパク質100種類以上と、マラリア免疫血清約20人分を用いて、新規抗原のスクリーニングを行った。その結果、多くのマラリア免疫血清と反応する抗原タンパク質を同定することに成功した。

如今，恶性疟原虫疟疾的基因组信息已被揭示，相信如果能够全面鉴定出在疟疾流行地区成人体内诱导产生保护性抗体的原虫抗原，将是开发疟疾抗疟药物的突破性进展。新的疟疾疫苗。然而，利用大肠杆菌等现有方法综合合成恶性疟原虫重组蛋白极其困难，迄今为止尚未进行过此类尝试。因此，申请人利用小麦胚芽无细胞蛋白质合成方法从裂殖子阶段的全长cDNA文库创建蛋白质阵列，这在之前的研究中已被证实可用于原生动物中的重组蛋白质合成。本研究旨在开发一种高通量候选疫苗抗原筛选方法，该方法可以使用来自疟疾流行地区居民的少量血清进行。 1. 利用小麦胚芽无细胞系统创建高通量生物素化蛋白芯片 为了创建裂殖子阶段原生动物的蛋白芯片，我们对前一年创建的 cDNA 克隆的小麦无细胞蛋白合成方法进行了修改，以产生使用能够高通量合成生物素化重组蛋白的系统，我们从恶性疟原虫裂殖子阶段小规模合成了100多种蛋白质。 2. α筛选法筛选新的裂殖子抗原 利用去年建立的高灵敏、小规模、高通量的抗原抗体反应测定系统，我们检测了上述100多种裂殖子相蛋白和约20种裂殖子相蛋白。使用人类样本筛选新抗原。结果，我们成功地鉴定了与许多疟疾免疫血清发生反应的抗原蛋白。

项目成果

Wheat germ cell-free system : A breakthrough in malaria vaccine candidate discovery

小麦胚芽无细胞系统：疟疾候选疫苗发现的突破

• 发表时间: 2008
• 作者: Feng;G・T;Kodama・X;Chen・K;Okada・T;Honda;Iriko H;Tsuboi T;Yano K;Mudeppa DG;Ghoneim A;Han ET;Tsuboi T
• 通讯作者: Tsuboi T

Novel sporozoite antigen discovery oi Plasmodium falciparum screened using human lmmunesera.

使用人类免疫血清筛选恶性疟原虫的新子孢子抗原的发现。

• 发表时间: 2007
• 作者: Feng;G・T;Kodama・X;Chen・K;Okada・T;Honda;Iriko H;Tsuboi T;Yano K;Mudeppa DG;Ghoneim A;Han ET;Tsuboi T;Tsuboi T
• 通讯作者: Tsuboi T

Wheat germ cell-free system-based production of malaria proteins for discovery of novel vaccine candidates

• DOI: 10.1128/iai.01539-07
• 发表时间: 2008-04-01
• 期刊: INFECTION AND IMMUNITY
• 影响因子: 3.1
• 作者: Tsuboi, Takafumi;Takeo, Satoru;Endo, Yaeta
• 通讯作者: Endo, Yaeta

Disruption of the Plasmodium berghei 2-Cys peroxiredoxin TPx-1 gene hinders the sporozoite development in the vector mosquito

• DOI: 10.1016/j.molbiopara.2008.03.002
• 发表时间: 2008-06-01
• 期刊: MOLECULAR AND BIOCHEMICAL PARASITOLOGY
• 影响因子: 1.5
• 作者: Yano, Kazuhiko;Otsuki, Hitoshi;Kawazu, Shin-Ichiro
• 通讯作者: Kawazu, Shin-Ichiro

Cell-free production of functional Plosmodium falciparum dihydrofolate reductasethymidylate synthase.

功能性恶性疟原虫二氢叶酸还原酶胸苷酸合酶的无细胞生产。

• 发表时间: 2007
• 期刊: Mol. Biochem. Parasitol. 151
• 作者: Feng;G・T;Kodama・X;Chen・K;Okada・T;Honda;Iriko H;Tsuboi T;Yano K;Mudeppa DG
• 通讯作者: Mudeppa DG