マラリア原虫の伝搬阻止に関与する2種の抗原遺伝子のクローニング

克隆两个参与阻断疟疾寄生虫传播的抗原基因

• 批准号: 08670278
• 负责人: 坪井 敬文
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Ehime University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08670278/
• 关键词: マラリア; オ-キネート; 伝搬阻止; ワクチン; 遺伝子クローニング

申請者らは、ネズミマラリア原虫(Plasmodium yoelii)オ-キネート表面の分子量22kD(Pys22)又は28kD(Pys28)の蛋白の一次構造を明らかにすることを目的として本研究を実施した。P. yoelii gametocyteをオ-キネート培養培地(Munderloh & Kutti,1987)を用いて培養し、この虫体から抽出したmRNAを用いてcDNAライブラリを作成した。次に塩基配列のデータベースを用いて、現在までに判明している全てのオ-キネート表面蛋白の一次構造の間で保存的な領域を同定し、その部位の塩基配列をもとに新たなネズミマラリア原虫オ-キネート表面蛋白遺伝子を同定するための、縮重したオリゴヌクレオチドPCRプライマーを合成した。上記cDNAライブラリを鋳型として、このプライマーを用いてPCRを行ったところ、予想されたサイズのDNAフラグメントが増幅された。そこでこのPCR産物をプラスミドにクローニングした後ジデオキシ法にて塩基配列を決定した。得られた塩基配列の解析から、2種類のクローンが存在することが明らかとなり、その塩基配列から類推されるアミノ酸配列を国立遺伝学研究所のデータベースを用いて比較すると、その内の1種はP.bergheiにおいて報告されたPbs21とは7割、P.gallinaceumのPgs25、Pgs28及びP.falciparumのPfs25とは4割の配列が一致していた。中でも上皮細胞増殖因子様の配列であるシステイン残基の数及び位置はPbs21及びPgs28のそれと完全に一致しており、Pgs25、Pfs25より2残基少なかったがその位置は同一であった。またもう1種のクローンのシステインの数及び位置はPfs25及びPgs25と完全に一致していた。以上の結果から、これらの遺伝子はマラリア原虫オ-キネート表面蛋白に特異的なものと考えられた。

申请人进行本研究的目的是阐明约氏疟原虫表面的分子量为22kD(Pys22)或28kD(Pys28)的蛋白质的一级结构。使用 ookinate 培养基（Munderloh & Kutti，1987）培养 P. yoelii 配子细胞，并使用从寄生虫中提取的 mRNA 创建 cDNA 文库。接下来，使用核苷酸序列数据库，我们鉴定了迄今为止已知的所有植物生长素表面蛋白的一级结构中保守的区域，并基于这些区域的核苷酸序列，我们合成了简并寡核苷酸PCR引物。鉴定疟疾寄生虫冲酸表面蛋白基因。当使用上述cDNA文库作为模板和这些引物进行PCR时，扩增出预期大小的DNA片段。因此，将该PCR产物克隆至质粒后，利用双脱氧法测定碱基序列。对获得的核苷酸序列的分析揭示了两种类型克隆的存在，并且当使用国立遗传学研究所数据库对从核苷酸序列推断出的氨基酸序列进行比较时，发现其中一种序列与Pbs21 在伯氏疟原虫中报道，与鸡疟原虫的 Pgs25 和 Pgs28 以及恶性疟原虫的 Pfs25 有 40% 的同一性。其中，表皮生长因子样序列半胱氨酸残基的数量和位置与Pbs21和Pgs28完全匹配，并且虽然比Pgs25和Pfs25少两个残基，但位置相同。另一个克隆中半胱氨酸的数量和位置与Pfs25和Pgs25完全匹配。从以上结果来看，这些基因被认为是疟疾寄生虫冲表面蛋白特异的。

项目成果

Takafumi Tsuboi et al.: "Primary structure of a novelookinete surface protein from Plasmodium berghei" Molecular and Biochemical Parasitology. (発表予定). (1997)

Takafumi Tsuboi 等人：“伯氏疟原虫新型动蛋白表面蛋白的主要结构”《分子与生化寄生虫学》（即将出版）。