新規三日熱マラリア伝搬阻止ワクチン候補抗原の同定

鉴定一种新型疫苗候选抗原以阻止间日疟原虫疟疾的传播

• 批准号: 14021082
• 负责人: 坪井 敬文
• 金额: $ 4.16万
• 依托单位: Ehime University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14021082/
• 关键词: 三日熱マラリア; 伝搬阻止ワクチン; 生殖母体; 遺伝子クローニング; 国際研究者交流; タイ

1.DNA免疫法を用いた特異抗血清の作成Pvs47及びPvs48の遺伝子をクローン化した哺乳類細胞発現用プラスミドをマウス、及びラットに注射してDNA免疫を行い、Pvs47及びPvs48の立体構造を認識する抗体を誘導することを試みた。その結果、これらの抗血清と三日熱マラリア原虫生殖母体を抗原に用いたWestern blot法及び間接蛍光抗体法により、Pvs48及びPvs47がいずれも約50kDaの蛋白として生殖母体表面に特異的に発現していることが確認された。またこれらの抗血清は、非還元条件下ではより強く原虫蛋白を認識し、明らかに移動度の異なる二種の蛋白をそれぞれ認識していた。以上の結果より、DNA免疫法を用いることにより、システインに富むPvs48及びPvs47のいずれの立体構造も認識できる特異抗体が作成できることが判明した。またこれらの結果は、1993年から現在まで、いかなる組換え蛋白を用いても特異抗体を作成できなかった熱帯熱マラリア原虫伝搬阻止ワクチン候補抗原Pfs48の研究にも応用しうる有用な知見と考えられた。2.Pvs47及びPvs48の遺伝子多型の解析タイ、バヌアツ、コロンビアのマラリア流行地において得られた三日熱マラリア原虫感染患者血液からDNAを抽出した。それらからPCR法を用いてPvs47及びPvs48遺伝子の全長を増幅し、遺伝子多型の解析を行った。その結果、23分離株の解析から、Pvs47では3カ所の同義置換、15カ所の非同義置換が認められ、非同義置換は前半部の6Cys-2Cysの部分に集中していた。Pvs48では4カ所の同義置換、7カ所の非同義置換が認められ、非同義置換はC末端に近い6Cysの部分に比較的多数認められた。また、Pfs48で報告されているのと同様、多型に地域的偏りが認められた。今後、これらの多型がワクチンとしての免疫原性に及ぼす影響について検討することも、重要な研究課題と考えられる。

1.使用DNA免疫法制备特异性抗血清将克隆有Pvs47和Pvs48基因的哺乳动物细胞表达质粒注射到小鼠和大鼠体内进行DNA免疫，并识别Pvs47和Pvs48的三维结构。尝试诱导抗体。结果，使用这些抗血清和间日疟原虫配子体作为抗原，通过蛋白质印迹法和间接荧光抗体法发现，Pvs48和Pvs47都以约50kDa的蛋白质在配子体表面特异性表达。此外，这些抗血清在非还原条件下对原生动物蛋白的识别能力更强，并且每种抗血清都识别迁移率明显不同的两种类型的蛋白。由以上结果可知，通过使用DNA免疫法，可以制作能够识别Pvs48和Pvs47这两种富含半胱氨酸的三维结构的特异性抗体。这些结果也被认为是有用的知识，可以应用于 Pfs48 的研究，Pfs48 是抑制恶性疟原虫传播的疫苗的候选抗原，从 1993 年至今，还没有使用任何重组蛋白制造出特异性抗体。 。 2. Pvs47和Pvs48基因多态性分析从泰国、瓦努阿图和哥伦比亚疟疾流行区的间日疟原虫感染患者的血液中提取DNA。由此，利用PCR方法扩增Pvs47和Pvs48基因的全长，并分析遗传多态性。结果，对23个分离株的分析显示，Pvs47中有3个同义替换和15个非同义替换，并且非同义替换集中在前半部分的6Cys-2Cys区域。在Pvs48中，观察到4个同义取代和7个非同义取代，并且在靠近C末端的6Cys部分观察到相对大量的非同义取代。此外，与 Pfs48 的报道类似，在多态性中观察到区域偏差。未来研究这些多态性对疫苗免疫原性的影响将是一个重要的研究课题。

项目成果

Tachibana M.et al.: "Two types of Plasmodium ovale defined by SSU rRNA have distinct sequences for ookinete surface proteins"Molecular and Biochemical Parasitology. 122. 223-226 (2002)

Tachibana M.等人：“由 SSU rRNA 定义的两种类型的卵形疟原虫具有不同的动动表面蛋白序列”《分子和生化寄生虫学》。

Kaneko O.et al.: "Gene structure and expression of a Plasmodium falciparum 220-kilodalton protein homologous to the Plasmodium vivax reticulocyte binding proteins"Molecular and Biochemical Parasitology. 121. 275-278 (2002)

Kaneko O.等人：“与间日疟原虫网织红细胞结合蛋白同源的恶性疟原虫 220 千道尔顿蛋白的基因结构和表达”分子和生化寄生虫学。