クラスリン被覆を介するリソソーム酵素の効率的選別輸送

通过网格蛋白涂层有效选择性转运溶酶体酶

• 批准号: 18050032
• 负责人: 和栗 聡
• 金额: $ 3.84万
• 依托单位: Fukushima Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18050032/
• 关键词: クラスリンアダプター; GGA; ユビキチン; トランスゴルジk"トワーク; マンノース6リン受容体; マンノース6リン酸受容体; クラスリン; トランスゴルジネットワーク; ライブセルイメージング; リソソーム酵素

本研究では,クラスリンアダプタータンパク質であるGGA1,2,3の個別機能,およびGGAのユビキチン結合の意義を解析する。1.GGA2を安定にノックダウンする細胞を作製し論文受理された(Hida etal.,in press)。本解析では,GGA2の発現を低下させてもGGA1,3の発現や局在様式に明らかな変化は認められなかった。このことにより,GGA1,2,3は別個に機能する可能性が示唆された。一方,カーゴタンパク質であるマンノース6リン酸受容体の細胞質部分にGFPを付加したキメラタンパク質(GFP-CIMPR-tail)を安定に発現するHeLa細胞を用いて,GGA1,2,3をノックダウンする実験を行った。通常のHeLa細胞とは異なり,同細胞では個々のGGA発現低下により,GFP-CIMPR-tailが局在するトランスゴルジネットワーク(TGN)の形態変化や細胞表面への局在変化を形態学的に検出できた。しかもこれら変化は,発現抑制したGGAにより異なっていた。以上よりGGAの機能異常をより鋭敏に検出できる実験系を確立できたとともに,3つのGGAには別個の機能が存在することを示唆する。2.GGA3のユビキチン結合能の意義を探るため,ユビキチン結合部位に変異を有するGGA3を作製した。VHS-GAT領域のみを発現して比較したところ,ユビキチン結合変異体はTGNやエンドソームへの結合が減弱していた。このことは膜への結合に際してユビキチン結合能が何らかの機能を担うことを示唆する。現在,同変異体を用いてユビキチン結合に依存した相互作用分子の探索を行っている。

在本研究中，我们将分析网格蛋白接头蛋白 GGA1、2 和 3 的各自功能，以及 GGA 泛素结合的意义。 1. 我们创建了稳定敲除 GGA2 的细胞，论文被接受（Hida 等人，出版中）。在此分析中，即使当 GGA2 的表达降低时，GGA1 和 3 的表达或定位模式也没有观察到明显的变化。这表明 GGA1、2 和 3 可能独立发挥作用。另一方面，使用稳定表达嵌合蛋白（GFP-CIMPR-tail）的HeLa细胞进行了敲低GGA1、2和3的实验，其中GFP被添加到货物蛋白甘露糖6-的细胞质部分。磷酸盐受体我做到了。与正常 HeLa 细胞不同，由于 HeLa 细胞 I 中单个 GGA 的表达减少，可以在形态学上检测到 GFP-CIMPR-tail 定位的跨高尔基体网络 (TGN) 形状的变化以及细胞表面定位的变化。能够做到。此外，这些变化根据表达被抑制的GGA而不同。综上所述，我们建立了一个可以更灵敏地检测GGA功能异常的实验系统，同时也表明这三种GGA具有不同的功能。 2. 为了探讨GGA3泛素结合能力的意义，我们创建了泛素结合位点发生突变的GGA3。当仅表达和比较 VHS-GAT 区域时，泛素结合突变体与 TGN 和内体的结合减弱。这表明泛素结合能力在与膜的结合中发挥一定作用。我们目前正在使用这种突变体来寻找依赖于泛素结合的相互作用分子。

项目成果

HeLa細胞で見られたGGA1,2,3の特異的発現低下よる表現型の違い

HeLa 细胞中观察到的 GGA1,2,3 表达特异性降低导致的表型差异

• 发表时间: 2008
• 作者: 池田寛子;亀高諭;和栗聡;池田 寛子
• 通讯作者: 池田 寛子

Loss of autophagy in the central nervous system causes neurodegeneration in mice

• DOI: 10.1038/nature04723
• 发表时间: 2006-06-15
• 期刊: NATURE
• 影响因子: 64.8
• 作者: Komatsu, Masaaki;Waguri, Satoshi;Tanaka, Keiji
• 通讯作者: Tanaka, Keiji

Homeostatic levels of p62 control cytoplasmic inclusion body formation in autophagy-deficient mice

• DOI: 10.1016/j.cell.2007.10.035
• 发表时间: 2007-12-14
• 期刊: CELL
• 影响因子: 64.5
• 作者: Komatsu, Masaaki;Waguri, Satoshi;Tanaka, Keiji
• 通讯作者: Tanaka, Keiji

Human RME-8 is involved in membrane trafficking through early endosome

人 RME-8 通过早期内体参与膜运输

• 发表时间: 2008
• 期刊: Cell Struct Funct 33
• 作者: Fujibayashi A;Taguchi T;Misaki R;Ohtani M;Dohmae N;Takio K;Yamada M;Gu J;Yamakami M;Fukuda M;Waguri S;S;Uchiyama Y;Yoshimori T;Sekiguchi K.
• 通讯作者: Sekiguchi K.

Specific depletion of GGA2 causes cathepsin D missortiong in HeLa cells

GGA2 的特异性缺失导致 HeLa 细胞中的组织蛋白酶 D 错配

• 发表时间: 2008
• 期刊: Archives of Histology and Cytology (印刷中)
• 作者: 飯沼貴之;他;Tatsuhiro Hida
• 通讯作者: Tatsuhiro Hida