造血ニッチを構成する膜蛋白質mkirreの機能解析

mkirre（一种构成造血生态位的膜蛋白）的功能分析

• 批准号: 17045010
• 负责人: 北村 俊雄
• 金额: $ 4.48万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17045010/
• 关键词: 造血; ストローマ細胞; ノックアウトマウス; レトロウイルスベクター; 造血ニッチ; 造血幹細胞; Cre-lox

本研究では、骨髄ストローマ細胞による造血幹細胞の自己複製制御メカニズムの解明を目的として、我々が以前同定した新規ストローマ因子mKirreの生理機能解析を進めている。抗体による免疫染色およびin situハイブリダイゼーションの結果はmKirreが長管骨骨端軟骨付近の骨梁の表面のオステオブラストの一部に発現していることを示した。この場所は造血ニッチと一致する部分であり、mKirreの造血幹細胞への作用を示唆した。H18年度はmKirre遺伝子のin vivo機能解析を行うため、mKirreノックアウトマウスの作製を行った。mKtrrecDNAをプローブにしてmKirre遺伝子を含むBACクローンを単離、BACクローンおよびマウス遺伝子データベースをもとに、mKirre遺伝子座の制限酵素マップを作成した。これをもとに、mKirre遺伝子の第1エクソンをLacZ遺伝子とneomycinカセットで置換するようにターゲティングベクターをデザインした。続いてこのターゲティングベクターをC57BL/6由来ES細胞にエレクトロポレーションで導入、neomycinによりセレクションし相同組み替え体をスクリーニングした。約400クローンのneomycin耐性クローンから、サザンプロットによりmKirre遺伝子座がターゲティングされている2クローンをえた。染色体解析からこれらのクローンはいずれも正常核型であり、キメラマウス作成のためblastcystインジェクションに使用した。計4回のインジェクションの結果、高キメラ率のキメラマウス数匹を得、これらをC57BL/6と交配しヘテロマウス作成を行っている。現在のところ出生したマウスは全てC57BL/6由来であり、ES細胞のgermline transmissionは認めていない。この結果は、mKirre遺伝子座の片方が破壊されると精子形成あるいは受精後の発生が障害される可能性も示唆しており、現在引き続きキメラマウスの交配を行うとともに、これらの異常が実際に見られるかどうか検討を開始したところである。

在这项研究中，我们正在促进对新的Stromad因子Mkirre的生理分析，以阐明通过骨髓间质细胞阐明造血干细胞的自我缩减控制机制。抗体免疫和原位杂交的结果表明，Mkirre是骨束表面上长管边缘pube表面上骨爆炸的一部分。这个地方是与造血壁ches相匹配的部分，表明对造血干细胞的影响。在2018财年，创建了Mkirre敲除小鼠以执行Mkirre基因在体内功能分析中。 MktrecDNA是作为探针的探针，分离了包含Mkirre基因的BAC克隆，并基于BAC克隆和小鼠基因数据库，我们创建了一个有限的Mkirre基因酶图。基于此，靶向载体旨在用LACZ基因和新霉素盒代替Mkirre基因的第一个exonson。随后，将该靶向载体引入源自C57BL/6的ES细胞中，具有电穿孔，新霉素选择，并尖叫着局部体。大约400个新霉素的克隆抗性克隆制造了两个由南部情节瞄准的克隆。从染色体分析中，这些克隆都是正常的核，用于爆炸注射以形成嵌合小鼠。由于总共进行了四次注射，我们获得了几个高奇异比率嵌合体小鼠，并与C57BL/6交叉以创建异性小鼠。目前，所有出生小鼠均源自C57BL/6，并且尚未确认ES细胞胚氨酸传播。结果还表明，Mkirre鬼魂之一被破坏了，并且可能会被精子形成或形成之后，并且嵌合体鼠标当前越过，并且实际上已经看到了这些异常。

项目成果

Integrin αIIbβ3 induces the adhesion and activation of mast cells through interaction with fibrinogen

整合素αIIbβ3通过与纤维蛋白原相互作用诱导肥大细胞粘附和活化

• 发表时间: 2006
• 期刊: J.Immunol. 176
• 作者: Baba T;Mimura J;Nakamura N;Harada N;Yamamoto M;Morohashi K;Fujii-Kuriyama Y.;沖 俊彦;中島 秀明;中島 秀明;福地 由美;川島 敏行;沖俊彦
• 通讯作者: 沖俊彦

Immune suppressor factor confers stromal cell line with enhanced supporting activity for hematopoietic stem cells

• DOI: 10.1016/j.bbrc.2005.11.146
• 发表时间: 2006-02-03
• 期刊: BIOCHEMICAL AND BIOPHYSICAL RESEARCH COMMUNICATIONS
• 影响因子: 3.1
• 作者: Nakajima, H;Shibata, F;Kitamura, T
• 通讯作者: Kitamura, T

Integrin αIIbβ3 induces the adhesion and activation of mast cells through interaction with fibrinogen.

整合素αIIbβ3通过与纤维蛋白原的相互作用诱导肥大细胞的粘附和激活。

• 发表时间: 2006
• 期刊: J. Immunol. 176
• 作者: Baba T;Mimura J;Nakamura N;Harada N;Yamamoto M;Morohashi K;Fujii-Kuriyama Y.;沖 俊彦
• 通讯作者: 沖 俊彦

Disruption of Sep6, a fusion partner gene of Mixed Lineage Leukemia(MLL), does not affect the ontogeny, Leukemogenesis induced by MLL-SEPT6, or the phenotype induced by the loss of Sept4

混合谱系白血病 (MLL) 的融合伴侣基因 Sep6 的破坏不会影响个体发育、MLL-SEPT6 诱导的白血病发生或 Sept4 缺失诱导的表型

• 发表时间: 2005
• 期刊: Mol.Cell.Biol. 280
• 作者: Aoyama H;Noguchi T;Misawa T;Nakamura T;Miyachi H;Hashimoto Y;Kobayashi H;小埜良一
• 通讯作者: 小埜良一

Functional analysis of an activating receptor LMIR4 as a counterpart of an inhibitory receptor LMIR3.

激活受体 LMIR4 作为抑制性受体 LMIR3 的对应物的功能分析。

• 期刊: J. Biol. Chem. (In press)
• 作者: Baba T;Mimura J;Nakamura N;Harada N;Yamamoto M;Morohashi K;Fujii-Kuriyama Y.;沖 俊彦;中島 秀明;中島 秀明;福地 由美;川島 敏行;沖俊彦;中島秀明;小埜良一;浦野敦司;箕嶋幸範;小埜良一;伊沢 久未
• 通讯作者: 伊沢 久未