β1インテグリン及び下流ドッキング蛋白Cas-Lのがん浸潤、転移での役割

β1整合素及下游对接蛋白Cas-L在癌症侵袭和转移中的作用

基本信息

批准号：
17014028
负责人：
森本幾夫
金额：
$ 3.78万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17014028/
关键词：
β1インテグリン Cas-L ドッキング蛋白 TGF-β Smad6 Smad7 癌浸潤癌転移

项目摘要

接着分子であり、シグナル伝達分子でもあるβ1インテグリンは、癌の浸潤、転移に重要な生物学的機能を有する。本研究では、β1インテグリン分子及びインテグリンを介するシグナル伝達の標的分子として我々がクローニングしたCas-Lの癌浸潤、転移における細胞生物学的解析をすることを目的とした。Cas-L分子は細胞分裂、増殖、遊走、接着など広範囲な機能に関与する105kDのドッキング蛋白であり、β1インテグリン刺激のみならず、TCR刺激により、'チロシンリン酸化される。Yeast two-hybrid法を用いたスクリーニングの結果、Cas-Lは癌化、癌転移に関与するTGF-βの阻害蛋白Smad6及びSmad7と結合することが明らかになった。免疫沈降法により、Full lengthのCas-Lの1ドメインの欠除によりSmad6及びSmad7とのドッキング機能が消失することが明らかとなり、Cas-Lの自然構造がSmad6及びSmad7との会合に重要であることが示唆された。一方、Smad6及びSmad7のN末端及びC末端の欠除変異体は依然としてCas-Lとのドッキング能力を保持しており、Smad6及び7はCas-Lといくつかの結合モチーフを有することが示唆された。さらにCas-LとSmad6及び7のMH2ドメイン(MH1ドメインではない)との相互作用がTGF-β誘導シグナル経路の増強に関与した。最後にsiRNAオリゴを用いてCas-Lの発現を低下させることによりHuh-7細胞のTGF-β誘導細胞増殖の抑制に抵抗性を示し、また同時にSmad2及びSmad3のリン酸化を減少させた。これらの結果からCas-LはTGF-βの腫瘍不応性に重要な役割を果たしており、TGF-βシグナル経路に鍵となる調節分子であることが強く示唆された。

β1整合素既是粘附分子又是信号转导分子，在癌症侵袭和转移中具有重要的生物学功能。在本研究中，我们旨在对 β1 整合素分子和 Cas-L 进行细胞生物学分析，我们将其克隆为整合素介导的信号转导的靶分子，在癌症侵袭和转移中。 Cas-L分子是105kD的对接蛋白，参与细胞分裂、增殖、迁移和粘附等多种功能，并且不仅通过β1整合素刺激而且通过TCR刺激而被酪氨酸磷酸化。使用酵母双杂交方法进行筛选发现，Cas-L 与 TGF-β 抑制蛋白 Smad6 和 Smad7 结合，参与癌化和癌症转移。免疫沉淀显示，全长Cas-L的一个结构域的缺失消除了其与Smad6和Smad7的对接功能，这表明Cas-L的天然结构对于其与Smad6和Smad7的关联很重要。另一方面，Smad6 和 Smad7 的 N 端和 C 端缺失突变体仍然保留与 Cas-L 对接的能力，表明 Smad6 和 7 具有多个与 Cas-L 结合的基序。此外，Cas-L 与 Smad6 和 7 的 MH2 结构域（但不是 MH1 结构域）的相互作用参与了 TGF-β 诱导信号通路的增强。最后，通过使用 siRNA 寡核苷酸减少 Cas-L 的表达，Huh-7 细胞对 TGF-β 诱导的细胞增殖抑制产生抵抗，同时 Smad2 和 Smad3 的磷酸化减少。这些结果强烈表明Cas-L在TGF-β肿瘤难治性中发挥重要作用，并且是TGF-β信号通路中的关键调节分子。