ES細胞特異的遺伝子群ECATの生殖細胞形成における役割

ES细胞特异性基因组ECAT在生殖细胞形成中的作用

基本信息

批准号：
16045210
负责人：
山中伸弥
金额：
$ 3.07万
依托单位：
Kyoto University (2005)Nara Institute of Science and Technology (2004)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

分化多能性は受精卵、エピブラスト、始原生殖細胞において維持され、生殖細胞を経て次世代へと伝えられる。早期胚に由来するES細胞もまた分化多能性を維持している。私たちはこれまでES細胞は恒常活性型のRas蛋白質であるERas(ECAT5)を特異的に発現していることや、ECAT4は分化多能性の維持に必須であるホメオボックス転写因子Nanogをコードすることを報告した。一方、ECAT8はTudorドメインを有する蛋白質をコードしており、やはりES細胞に加えて精巣でも発現が認められる。本研究の目的はNanogの生殖細胞形成における役割をコンディショナルノックアウトマウスにより解析すること、およびECAT8が精子形成において果たす役割を明らかにすることである。1.NanogとECAT8の生殖細胞における発現様式の解析 Nanog遺伝子座に緑色蛍光蛋白質(EGFP)がノックインされたマウスを作製し、生殖細胞形成におけるNanogの発現を可視化した。2.Nanog遺伝子のコンディショナルノックアウトマウス Nanogのホメオドメインをコードする第2エキソンを2つのloxP配列で囲んだマウスを作製した。しかし寄与率のキメラマウスは誕生したがヘテロ変異マウスは得ることができなかった。3.ECAT8ノックアウトマウスの解析 ECAT8ノックアウトマウスのオスにおいては、減数分裂の異常により精母細胞が細胞死をきたし、不妊となることがわかった。シナプシスに必須の蛋白質Scp1の蛋白質発現が減少することがわかった。4.ECAT8結合RNAの同定 ECAT8はTudorドメインを有することからRNA結合蛋白質である可能性が高い。実際、ECAT8はScp1のRNAと弱いながらも結合することが示唆された。

分化的多能估计保持在受精卵，层细胞和原始生殖细胞中，并通过生殖细胞传递到下一代。源自早期胚胎的ES细胞也保持分化多能。我们以前已经报道了ES细胞专门表达同源活性Ras蛋白ERA（ECAT5），并且ECAT4编码Nanog，Nanog是一种对维持分化多能的必不可少的同型转录因子。另一方面，ECAT8编码带有都铎式结构域的蛋白质，除ES细胞外，还在睾丸中表达。这项研究的目的是通过条件敲除小鼠分析Nanog在生殖细胞形成中的作用，并阐明ECAT8在精子发生中的作用。 1。生成生殖细胞中纳米和ECAT8的表达模式的分析，其中在纳米基因座处敲入绿色荧光蛋白（EGFP），并可视化生殖细胞形成过程中Nanog的表达。 2。纳米基因小鼠的条件敲除小鼠是用第二个外显子编码纳米的同源域的第二个外显子，该外显子被两个LOXP序列包围。但是，具有贡献率的嵌合小鼠诞生了，但没有异质的小鼠。 3。对雄性ECAT8敲除小鼠的ECAT8敲除小鼠的分析，发现精子细胞因减数分裂异常而杀死并引起不育症。发现SCP1的蛋白表达是突触的必需蛋白质的必需蛋白质。 4。鉴定ECAT8结合RNA，因为ECAT8具有tudor结构域，因此可能是RNA结合蛋白。实际上，有人提出ECAT8与SCP1 RNA弱结合。