カルモジュリン結合蛋白質によるシンタキシン機能のCa^<2+>依存性制御の解析

钙调蛋白结合蛋白对突触蛋白功能的Ca^2+依赖性调节的分析

• 批准号: 16044216
• 负责人: 五十嵐 道弘
• 金额: $ 3.84万
• 依托单位: Niigata University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16044216/
• 关键词: ミオシンV; シンタキシン; SNARE機構; カルシウム; 開口放出; 原子間力顕微鏡; ノックインマウス; 小胞輸送; カルモジュリン; 神経細胞

シナプス小胞のリサイクリングは、種々のステップで異なる濃度のCa^<2+>を要求すると考えられている。報告者は、小胞のtranslocationに関わるsubcellular Ca^<2+>(0.1-1μM)を要求する、syntaxin-1Aの結合蛋白質としてmyosin-Vを見出し、その解析を行った。この分子が、syntaxin-1Aと結合する結合部位を明らかにするため、原子間力顕微鏡によって複合体形成を直接、可視化することに成功した。その結果、結合は明確にneck部分で生じていることを証明した。Neck部分に結合するCaMはsubmicromolar Ca^<2+>依存性に解離し、CaMが外れたIQ domainにsyntaxin-1Aが結合することが示された。この部位を認識する抗体を作成して、副腎髄質クロマフィン細胞へ導入して開口放出への影響を調べたところ、開口放出は阻害された。さらに、この過程は開口放出の早い相には影響せず、小胞が供給されて生ずる遅い相の放出を選択的に阻害することがわかった。以上の結果はこの結合により、小胞がmyosin-Vを介して、形質膜のsyntaxin-1Aに結合でき、SNARE複合体形成を進める前段階であるtetheringの分子的実体である可能性を示している。非神経細胞の形質膜型syntaxinアイソフォームであるsyntaxin-2,3,4についても同様の結合が起こるかどうかを解析し、結合親和性はやや低いものの同様の反応が起こることを証明した。報告者は、自己リン酸化型CaMKIIがsubmicromolar Ca^<2+>依存性にsyntaxin-1Aのlinker domainに結合する機構を報告した(J Neurosci 22:3342-51['02])が、これをさらに精査するためにsyntaxin-1A変異ノックインマウスを作成に成功した。

据认为，突触囊泡的回收需要Ca^<2+>，并在各个步骤中以不同的浓度。记者发现肌球蛋白-V是一种语法素1a结合蛋白，要求亚细胞Ca^<2+>（0.1-1μm）与囊泡的易位有关。该分子成功地通过插入力显微镜可视化复合物的形成，以阐明与语法素1a结合的连接位点。结果，它证明了结合显然发生在颈部。结果表明，ca^<2+>对凸轮对颈部部分的依赖性ca^<2+>，并将语法素1a粘合到凸轮脱落的IQ域。一种识别该部分的抗体是由创建的，被引入了肾上腺勋章Chromafin细胞，并检查了对开放释放的影响，并抑制了开放释放。此外，此过程并不影响开口的开口阶段，并且发现由Vye供应产生的慢相的释放被选择性地抑制。以上结果表明，Vye可以通过肌球蛋白V和束缚的技术实体粘合到转换的语法1a，这是SNARE复合物形成之前的先前阶段。语法-2,3,4，一种非神经细胞转化的语法同工型，分析了相似的键，证明了相似的反应发生的结合亲和力略低。记者报道了自氧化的CAMKII与Syntaxin-1a的接头结构域结合到亚旋风ca^<2+>（J Neurosci 22：3342-51 ['02]）。 - 在鼠标中进行仔细检查。

项目成果

The structure of C-banded human metaphase chromosomes as observed by atomic force microscopy.

• DOI: 10.1679/aohc.68.81
• 发表时间: 2005
• 期刊: Archives of histology and cytology
• 作者: D. Fukushi;T. Ushiki

Role of Ser50 phosphorylation in SCG10 regulation of microtubule depolymerization

• DOI: 10.1002/jnr.20462
• 发表时间: 2005-05
• 期刊: Journal of Neuroscience Research
• 影响因子: 4.2
• 作者: T. Togano;M. Kurachi;Michitoshi Watanabe;G. Grenningloh;M. Igarashi

CHRONIS : an animal chromosome image database.

CHRONIS：动物染色体图像数据库。

• 发表时间: 2005
• 期刊: Chromosome Res. 13(6)
• 作者: Toyabe S;Akazawa K;Fukushi D;Fukui K;Ushiki T.
• 通讯作者: Ushiki T.

Glia-derived inhibitors of axonal regrowth : Implication for the molecular strategy of axonal regeneration.

神经胶质细胞衍生的轴突再生抑制剂：对轴突再生分子策略的影响。

• 发表时间: 2005
• 期刊: Acta Med Biol 53(2)
• 作者: Igarashi M;Sato M
• 通讯作者: Sato M

Cytoarchitecture of the normal rat olfactory epithelium : light and scanning electron microscopic studies.

正常大鼠嗅上皮的细胞结构：光和扫描电子显微镜研究。

• 发表时间: 2004
• 期刊: Arch Histol Cytol. 67(2)
• 作者: Nomura T;Takahashi S;Ushiki T
• 通讯作者: Ushiki T