原子間力顕微鏡による蛋白質複合体の効率的観察法の開発

使用原子力显微镜开发蛋白质复合物的有效观察方法

• 批准号: 19659067
• 负责人: 五十嵐 道弘
• 金额: $ 2.05万
• 依托单位: Niigata University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19659067/
• 关键词: 原子間力顕微鏡; 蛋白質複合体; 分子イメージング; 膜蛋白質; 細胞内情報伝達; バキュロウイルス; 組換え蛋白質; Sf9細胞; ミオシンV; カルモジュリン; シンタキシン; アイソフォーム

蛋白質複合体の作成については、バキュロウイルスの発現ベクター系を用いてこれを哺乳動物株細胞に導入する方法を併用した。導入した系には蛍光蛋白質GFP融合体を結合させ、特に膜蛋白質でもできる系を使用した。この系で、膜結合部位と膜外表、細胞内のアダプター分子結合部位を一貫して制御できた。すなわち、細胞外に接着分子結合部位を導入し、この発現分子をクラスターさせて融合蛋白質を可視化することに成功した。この系を原子間力顕微鏡に導入したが、発現量が十分な解像力を呈するほどには得られなかった。またタグとの相互作用が十分に強くなかったと思われるため、配列はまだ不完全であった。すなわち、部分的にそのような分子複合体と思われる像があったが、頻度が少ないために形態学的にそろった可視化には更なる生化学的手法の改良が必要と思われた。但し、膜蛋白質及びその細胞内情報伝達部位を一貫して可視化する方法を得た点、バキュロウイルス-昆虫細胞系での大量蛋白質産生と光学的可視化が可能な哺乳動物細胞系を連動させた発現系の構築の成功には大きな意義があったといえる。なおこの系の構築には、代表者の研究室の武内恒成准教授の協力を得た。分担者牛木の原子間力顕微鏡についても引き続き、バードウェア面、ソフトウェア面での画像解析の解像度上昇と操作簡便化に一定の改良が見られた。これによって、代表者らの研究結果との組合せで、萌芽研究としての目的で一定の結果は到達したと考えられるが、さらなる両者の共同で更なる改良が必要であることを確認した。

关于蛋白质复合物的创建，使用真空病毒表达载体系统将其引入哺乳动物库存细胞的方法。引入的系统是荧光蛋白GFP融合的组合，并且可以用膜蛋白制成的系统特别可能。在该系统中，始终控制膜连接的位点，外部表格表和细胞内衔接子分子分子关节。换句话说，在细胞外引入了粘合分子关节位点，并聚集了该表达分子以可视化融合蛋白。该系统被引入原子力显微镜中，但表达不足以显示足够的分辨率。阵列仍然不完整，因为与标签的相互作用不够强。换句话说，有一个部分雕像似乎是一种分子复合物，但是由于低频，人们认为进一步可视化是进一步改善生化方法的必要意义。然而，这是一种始终如一地可视化膜蛋白的方法及其细胞内信息传播位点，这是一种可以在真空病毒感染细胞系统中产生的哺乳动物动物细胞系统和光学可视化。系统构建的成功非常重要。此外，该系统的构建是由代表实验室Tsuneari Takeuchi副教授获得的。继续提高鸟类和软件上图像分析的分辨率以及图像分析的增加，并简化了操作简化。结果，人们认为与代表的研究结果相结合达到了一定的结果，但已确认两者共同需要进一步改进。

项目成果

Establishment and characterization of monoclonal and polyclonalantibodies against human intestinal fatty acid-binding protein (I-FABP)using synthetip regional peptides and recombinant I-FABP.

使用合成末端区域肽和重组 I-FABP 建立抗人肠脂肪酸结合蛋白 (I-FABP) 的单克隆和多克隆抗体并进行表征。

• 发表时间: 2008
• 期刊: J Im加unoassay Immunochem 29
• 作者: Kajiura s;Yashiki T;Funaoka H;他;10名中8番目(代表者)
• 通讯作者: 10名中8番目(代表者)

Handbook of Neurochemistry (3rd ed.)vol. 1 (Mikoshiba K ed.)

神经化学手册（第三版）卷。

• 发表时间: 2008
• 作者: Igarashi M;Ohko K
• 通讯作者: Ohko K

自己リン酸化CaMKII結合能を有しない変異シンタキシン1Aノツクインマウスおけるシナプス小胞輸送の変化

无法结合自磷酸化 CaMKII 的突变突触蛋白 1A 敲入小鼠中突触小泡运输的变化

• 发表时间: 2008
• 作者: 渡漆裕美;多田幸代;伊藤理恵子五十嵐道弘
• 通讯作者: 伊藤理恵子五十嵐道弘

Atomic force microscopy for imaging human metaphase chromosomes

• DOI: 10.1007/s10577-008-1241-7
• 发表时间: 2008-05-01
• 期刊: CHROMOSOME RESEARCH
• 影响因子: 2.6
• 作者: Ushiki, Tatsuo;Hoshi, Osamu
• 通讯作者: Hoshi, Osamu

神経軸索の成長シュミレーシヨ・ンの開発

神经轴突生长模拟的发展

• 发表时间: 2008
• 作者: 小林太一朗;野住素広;寺島健史五十嵐道弘;赤澤宏平
• 通讯作者: 赤澤宏平