治療遺伝子発現型の増殖性遺伝子組換えヘルペスウイルスベクターの開発

表达治疗基因的增殖性重组疱疹病毒载体的开发

基本信息

批准号：
16023218
负责人：
藤堂具紀
金额：
$ 3.84万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究は、ウイルスゲノムを遺伝子工学的に改変し、癌細胞で選択的に複製する単純ヘルペスウイルスI型(HSV1)を作製して、抗腫瘍効果が高く且つ安全で臨床応用可能な新しい治療ベクターの研究開発を目的とした。特に、三重変異を有する第三世代HSV-1のG47を基本骨格として、治療遺伝子を発現する増殖性「武装」遺伝子組換えHSV-1を作製し、癌治療に対する有効性を評価した。BAC(bacterial artificial chromosome)プラズミドと2つのrecombinase系を利用し、G47のICP6遺伝子欠失部位に任意の治療遺伝子を組み込めるHSV-1ベクター作製系を確立した。このBACシステムにより、従来遺伝子組換えHSV-1の作製に長期間要していたところを、短期間で容易に作製し、且つ複数の治療遺伝子を挿入することが可能となった。この系を用い、まずG47のICP6遺伝子をinsertion inactivationからdeletionに改良したT-01を作製した。更に、T-01にマウスIL-12遺伝子を挿入したT-mfIL12を作製した。HSV1が腫瘍内で複製することに伴って特異的抗腫瘍免疫を惹起することから、免疫刺激遺伝子を治療遺伝子とする「武装」遺伝子組換えHSV-1は、抗腫瘍効果が増強すると期待された。実際、HSV-1に感受性の高いA/Jマウスと、同系で低免疫原性のNeuro2a神経芽腫細胞を用い、皮下腫瘍モデルで効果を検討したところ、両側皮下腫瘍の片側への腫瘍内投与にて、両側いずれの腫瘍に対してもT-mfIL12はT-01に比べ有意に大きな抗腫瘍効果を示した。T-mfIL12はまた、T-01では無効であった静脈内投与でも、皮下腫瘍に対し抗腫瘍効果を示した。治療遺伝子発現型の増殖型遺伝子組換えHSV-1は、新たな癌治療のツールとして高い発展性を有することが示された。

这项研究是一种新的治疗载体，具有很高的抗肿瘤作用，并且具有很高的抗肿瘤作用，可产生简单的疱疹病毒I（HSV1），这是一种基因工程和选择性重复的病毒基因组到R＆D。特别地，使用三代HSV-1的G47进行三重转化，产生了表达治疗基因的增殖“武装”遗传重组HSV-1，并评估了癌症治疗的有效性。使用BAC（细菌人造染色体）质粒和两个重组酶系统，我们建立了一个HSV-1载体产生系统，该系统将任何治疗基因掺入G47 ICP6基因损失中。使用该BAC系统，可以轻松地创建一个地方，使常规的遗传重组HSV-1在短时间内长时间需要长时间，并插入多个治疗基因。使用此系统，首先使用该系统创建了从插入失活到删除的T-01。此外，将带有小鼠IL-12基因的T-MFIL12插入了T-01。由于HSV1在肿瘤中复制，因此预计导致免疫刺激基因作为治疗基因的“武装”遗传重组HSV-1有望增强抗肿瘤作用。实际上，当HSV-1对HSV-1敏感并且相似性时，使用相似和低的免疫成分神经2A神经瘤细胞检查皮下肿瘤模型，并在皮下肿瘤在两侧的一侧给予皮下肿瘤。皮下肿瘤。 T-MFIL12也对皮下肿瘤也有抗肿瘤作用，即使在静脉注射静脉内给药中，T-01在T-01中也无效。已经表明，HSV-1（一种HSV-1）是一种治疗基因表达类型，作为新癌症治疗的工具，具有很高的发育。