癌特異的複製型ウイルスベクターを用いた効果的な免疫遺伝子治療の基礎開発

使用癌症特异性复制病毒载体进行有效免疫基因治疗的基础开发

基本信息

批准号：
17016024
负责人：
藤堂具紀
金额：
$ 4.99万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17016024/
关键词：
癌ウイルスバイオテクノロジーゲノム遺伝子

项目摘要

本研究は、ウイルスゲノムを遺伝子工学的に改変して、癌細胞で選択的に複製する増殖型単純ヘルペスウイルスI型(HSV-1)ベクターに直接免疫刺激遺伝子を挿入し、ウイルス複製に伴う直接的な殺細胞効果に加え強力な抗腫瘍免疫作用を有する新治療ベクターの研究開発を目的とした。新規に開発した三重欠失変異を有する増殖型HSV-1(T-01)のICP6遺伝子欠失部位に、任意の治療遺伝子を組み込むことのできるHSV-1ベクター作製系(BACシステム)を利用した。このシステムにより、従来遺伝子組換えHSV-1の作製に長期間要していたところを、短期間で容易に作製し、且つ複数の治療遺伝子を挿入することが可能となった。マウスIL-12遺伝子を挿入したT-mfIL12を作製した。HSV-1が腫瘍内で複製することに伴って特異的抗腫瘍免疫を惹起することから、免疫刺激遺伝子を発現する「武装」遺伝子組換えHSV-1は、抗腫瘍効果の増強が期待される。実際、HSV-1に感受性の高いA/Jマウスと、同系で低免疫原性のNeuro2a神経芽腫細胞を用い、皮下腫瘍モデルで効果を検討したところ、両側皮下腫瘍の片側への腫瘍内投与にて、両側いずれの腫瘍に対してもT-mfIL12はT-01に比べ有意に大きな抗腫瘍効果を示した。遠隔腫瘍に対するT-mfIL12の効果発現にはTリンパ球を必要とし、全身性抗腫瘍免疫を介することが判明した。T-mfIL12はまた、静脈内投与でも、皮下腫瘍に対する抗腫瘍効果が確認された。免疫刺激遺伝子発現型の増殖型遺伝子組換えHSV-1は、新たな癌治療のヅールとして高い発展性を有することが示された。抗腫瘍免疫における役割の重要性が認識されてきたサイトカイン等の遺伝子を用いて新たな増殖型治療ベクターを作製することは、作用機序の解明と抗腫瘍効果および安全性の向上の両面において意義が大きい。

在这项研究中，我们对病毒基因组进行了基因改造，并将免疫刺激基因直接插入到增殖的I型单纯疱疹病毒（HSV-1）载体中，该载体可在癌细胞中选择性复制，目的是研究和开发具有强效的新治疗载体。除细胞杀伤作用外，还具有抗肿瘤免疫作用。我们使用了新开发的HSV-1载体生产系统（BAC系统），该系统可以将任何治疗基因整合到具有三重缺失突变的增殖性HSV-1（T-01）的ICP6基因缺失位点中。利用该系统，可以在短时间内轻松生产重组HSV-1，并插入多个治疗基因，而传统上需要很长时间才能生产重组HSV-1。我们创建了 T-mfIL12，其中插入了小鼠 IL-12 基因。由于HSV-1在肿瘤内复制时会诱导特异性抗肿瘤免疫，因此表达免疫刺激基因的“武装”重组HSV-1有望增强抗肿瘤效果。事实上，当我们使用对 HSV-1 高度敏感的 A/J 小鼠和同基因、低免疫原性 Neuro2a 神经母细胞瘤细胞研究皮下肿瘤模型中的效果时，我们发现对双侧皮下肿瘤 T 的一侧进行瘤内给药-mfIL12对双侧肿瘤显示出比T-01显着更强的抗肿瘤作用。研究发现，T-mfIL12对远处肿瘤的作用需要T淋巴细胞，并由全身抗肿瘤免疫介导。 T-mfIL12 也被证实在静脉注射时对皮下肿瘤具有抗肿瘤作用。表达免疫刺激基因的增殖性重组HSV-1已被证明具有作为新的癌症疗法的巨大潜力。利用细胞因子等基因创建新的增殖治疗载体，其在抗肿瘤免疫中的重要作用已被认识，无论是在阐明作用机制还是提高抗肿瘤功效和安全性方面都具有重要意义。