抗腫瘍免疫賦活能を有する癌特異的複製型ヘルペスウイルスベクターの基礎開発

具有抗肿瘤免疫刺激能力的癌症特异性复制性疱疹病毒载体的基础研究

基本信息

批准号：
18015011
负责人：
藤堂具紀
金额：
$ 7.17万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18015011/
关键词：
癌ウイルスバイオテクノロジーゲノム遺伝子

项目摘要

本研究は、ウイルスゲノムを遺伝子工学的に改変して、癌細胞で選択的に複製する増殖型単純ヘルペスウイルスI型(HSV-1)ベクターに直接免疫刺激遺伝子を挿入し、ウイルス複製に伴う直接的な殺細胞効果に加え強力な抗腫瘍免疫作用を有する新治療ベクターの研究開発を目的とした。三重欠失変異を有する増殖型HSV-1(T-01)のICP6遺伝子欠失部位に、任意の治療遺伝子を組み込むことのできるHSV-1ベクター作製系(BACシステム)を利用した。HSV-1に感受性の高いA/Jマウスと、同系で低免疫原性のNeuro2a神経芽腫細胞を用いて評価を行った。マウスIL-12遺伝子を挿入したT-mfIL12は、両側皮下腫瘍モデルにおける片側腫瘍内投与で、両側いずれの腫瘍に対してもT-01に比べ有意に高い抗腫瘍効果を示した。遠隔腫瘍に対するT-mfIL12の効果はTリンパ球の免疫反応を介することが判明した。更にマウスIL-23を、IRESを用いて2つのサブユニットを発現させたT-mIL23iresと、single chainとして発現させたT-mIL23scを作製した。In vitroではいずれもT-01と同等のウイルス複製能を示したが、T-mIL23scはT-mIL23iresに比べ約100倍高いIL-23発現量を示した。皮下腫瘍モデルにおける腫瘍内投与では、T-mIL23iresとT-mIL23scはいずれもT-01に比べ有意に高い抗腫瘍効果を示したが、低用量ではT-mIL23scの方がT-mIL23iresに比べより高い効果を呈した。両側皮下腫瘍モデルにおける片側投与で、T-mfIL12とT-mIL23scを併用すると、両側いずれの腫瘍に対しても、それぞれの単独投与に比べ有意に高い治療効果を示した。種々の抗腫瘍免疫賦活活性を有する癌特異的複製型HSV-1の効果的な使用により、低用量で高い治療効果を出せることが示された。

在这项研究中，我们对病毒基因组进行了基因改造，并将免疫刺激基因直接插入到增殖的I型单纯疱疹病毒（HSV-1）载体中，该载体可在癌细胞中选择性复制，目的是研究和开发具有强效的新治疗载体。除细胞杀伤作用外，还具有抗肿瘤免疫作用。我们使用了HSV-1载体生产系统（BAC系统），该系统可以将任何治疗基因整合到增殖性HSV-1（T-01）的ICP6基因缺失位点中，该位点具有三重缺失突变。该评估是使用对 HSV-1 高度敏感的 A/J 小鼠和同基因、低免疫原性 Neuro2a 神经母细胞瘤细胞进行的。插入了鼠IL-12基因的T-mfIL12在双侧皮下肿瘤模型中对双侧肿瘤显示出比T-01显着更高的抗肿瘤效果。 T-mfIL12 对远处肿瘤的作用被发现是由 T 淋巴细胞的免疫反应介导的。此外，我们还创建了 T-mIL23ires（使用 IRES 表达小鼠 IL-23 的两个亚基）和 T-mIL23sc（将其表达为单链）。在体外，两者都显示出与T-01相同的病毒复制能力，但T-mIL23sc显示出比T-mIL23ires高约100倍的IL-23表达。当在皮下肿瘤模型中瘤内给药时，T-mIL23ires和T-mIL23sc均表现出比T-01显着更高的抗肿瘤效果，但在低剂量下，T-mIL23sc比T-mIL23ires具有更高的抗肿瘤效果。当在双侧皮下肿瘤模型中单侧给药时，联合使用T-mfIL12和T-mIL23sc对双侧肿瘤的治疗效果显着高于各自单独给药时的效果。研究表明，有效利用具有多种抗肿瘤免疫刺激活性的癌症特异性复制型HSV-1，可以在低剂量下产生较高的治疗效果。