ユビキチンによる遺伝的組換えの抑制とゲノム恒常性維持機構の解析

泛素对基因重组的抑制及基因组稳态维持机制分析

基本信息

批准号：
16021256
负责人：
山尾文明
金额：
$ 3.01万
依托单位：
National Institute of Genetics
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16021256/
关键词：
遺伝的組換えユビキチン DNA損傷修復

项目摘要

分裂酵母のユビキチン結合酵素E2(Ubc)の欠損による表現型を系統的に調べる過程で、その一つ、Ubc7の欠損した細胞では相同組み換えの頻度が劇的に上昇していることを見い出した。さらに、Ubc7破壊株の細胞は紫外線やMMSに対して野生株より抵抗性を示し、この抵抗性がRhp51(RecAホモログで、組み換え反応で中心的役割を果たす)の活性に依存していた。これらのことは、Ubc7欠損が相同的組み換え能とそれに伴うDNA障害の修復能のそれ自体を活性化していることを示唆していた。また同時に、相同組み換えの頻度の上昇が染色体全領域で一般的に起こっているものであることも示唆している。ユビキチンリガーゼの最も基本タイプのサブファミリーはCullinタンパク質(Cul)をコアにして、ユビキチン結合酵素E2(Ubc)、活性中心としてのRing Fingerタンパク質、基質認識の役目を担うアダプタータンパク質を配置した複合体である。分裂酵母には3種(cullin1、3、4)がホモログとして存在する。Pcu3欠損株で重複配列間のポップアウトの頻度が上昇し、紫外線とMMSに対して野生株よりも抵抗性を示した。同じ頃、米国のグループから分裂酵母Ubc7はCUL3ホモログのPcu3と相互作用することが報告された。Cullin3に結合するタンパク質群としてBTBドメインを有するタンパク質が注目された。分裂酵母には現在までに3種が認められる。これらが基質との相互作用を担うアダプター分子として作用する可能性があるので、これらと相互作用するタンパク質の検定を2-hybrid法とタグ標識したBTBタンパク質と共免疫沈降するタンパク質の検索を行っている。他方、この間に我々が観察した組換え頻度の上昇が、分裂酵母の一部の株に固有である(株依存性がある)ことが判明し、このユビキチン系による組換えの制御にはもう一つの未知の因子が関わると考えられる。この因子が何であるかを現在検索中である。

在由于福利酵母E2（UBC）的缺乏而系统地检查表达类型的过程中，发现其中一个同源重组的频率在UBC7缺失的细胞中急剧上升。此外，UBC7破坏菌株的细胞对紫外线和MM的抗性表现出抗性，并且这种耐药性取决于RHP51的活性（RECA同源物在重组反应中起着核心作用）。这些被认为是通过同性重组能力并随附的DNA障碍恢复而激活UBC7缺乏症。同时，这也表明同源重组频率的上升通常在整个染色体区域发生。 Ubikitin Rigase的最基本亚科是具有Cullin蛋白（CUL），泛素结合酶E2（UBC）的核心，环手指蛋白作为活性中心，以及在底物识别中起作用的适配器蛋白。作为同源物，有三种类型（Cullin1，3，4）。重复布置与PCU3缺陷之间的弹出频率有所增加，并且比野生股票对紫外线和MMS的抵抗力更高。大约在同一时间，一群美国报告说，分裂的酵母UBC7与CUL3同源物PCU3相互作用。注意到具有BTB结构域作为与Cullin3结合的蛋白质组的蛋白质。迄今为止，分裂酵母有三种类型。由于这些可能充当与底物相互作用的衔接分子，因此搜索与这些蛋白质相互作用的蛋白质的测试，以使用2-杂化方法覆盖免疫力和标签签名的BTB蛋白。另一方面，已经发现，我们在此期间观察到的重组是特定于某些部门酵母菌（具有库存依赖性的），这是该泛素系统对重组的另一种控制被认为涉及一些未知因素。我们目前正在搜索这个因素是什么。