アミノ酸情報感知伝達システムを担う分子情報の集積と構築

在氨基酸信息传感和传输系统中发挥作用的分子信息的积累和构建

基本信息

批准号：
16013231
负责人：
米澤一仁
金额：
$ 3.14万
依托单位：
Kobe University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16013231/
关键词：
mTOR raptor 細胞成長質量分析アミノ酸

项目摘要

本研究課題は、細胞成長制御シグナリングを司る蛋白質複合体の構成メンバーを同定することを目的として、プロテオミクス的手法によってmammalian target of rapamycin(mTOR)を介したシグナル伝達系を担う新規蛋白質を探索、同定し、その蛋白質のmTORシグナル伝達系における機能を解析することである。昨年に引き続き、申請通り、最近我々が見出した新規蛋白質、mTORシグナル伝達系のスキャフォールド蛋白質raptorに結合する蛋白質の探索、さらにmTORそのものをベイトとした結合蛋白質の探索、同定を試みた。RaptorおよびmTORに、FLAGタグを付加したリコンビナント蛋白質をHEK293細胞に発現させ、このFLAGタグを付加した蛋白質と共精製される蛋白質を、SDS-PAGEによって分離し、質量分析法による同定を試みた。その結果、有意に結合する蛋白質として数種の候補蛋白質が同定された。そのなかで、今後mTORシグナル伝達系やこの系によってアミノ酸代謝システム、細胞成長を制御するシステムがいかに制御されているのかを解明する重要な手がかりとなりうる40K、120Kの分子量を有する機能未知蛋白質、および80Kの分子量を有するアミノ酸代謝に関与する蛋白質が有意な結合蛋白質として同定された。蛋白質リン酸化酵素であるmTORの基質としては、現在のところ、40Sリボソームの構成蛋白質の一つ、S6蛋白質をリン酸化するp70 S6キナーゼと翻訳開始因子eIF-4Eの活性を制御する4EBP1の2種類のみが知られているが、mTORの新規な基質となる可能性を持った分子も同定された。今後、これらの候補分子の生化学的な解析を進め、mTORシグナル伝達系、そして、細胞成長制御への寄与を明らかにしていきたい。

这项研究任务爆炸了一种新的蛋白质，该蛋白质通过雷帕霉素的哺乳动物靶标（MTOR），目的是识别控制细胞生长控制信号的蛋白质复合构件。 MTOR信号传输系统中的蛋白质。去年应用程序后，我们试图搜索和识别最近发现的新蛋白质，即一种与MTOR信号传输的Scalafold蛋白猛禽结合的蛋白质，并使用MTOR本身探索和识别键蛋白。在HEK293细胞中表达了添加到猛禽和MTOR中的标记标签的重组蛋白，并且蛋白质是指已添加到此标志标签的蛋白质通过SDS-PAGE分离，并尝试了质量特异性分析方法识别。结果，将几种类型的候选蛋白鉴定为显着结合蛋白。其中，MTOR信号传输系统，氨基酸代谢系统和控制细胞生长的系统由该系统控制，并且可以阐明如何控制细胞生长，具有120K功能性蛋白分子量和参与具有80k分子量的氨基酸代谢的蛋白质被确定为显着的结合蛋白。目前，两种类型的MTOR是蛋白质磷酸化的酶，目前是40S核糖体4EBP1的构型蛋白质之一，它控制了P70 S6激酶的活性，p70 S6激酶磷酸化，磷酸化S6蛋白，又是转化开始因子的复兴。 EIF-4E仅知道，但也可以确定有可能成为MTOR的新底物的分子。将来，我想促进对这些候选分子的生化分析，并阐明对MTOR信号传输系统和细胞生长控制的贡献。