RNA性転移因子(SINE)の生成に共役した組み換えの分子機構

与 RNA 转座元件 (SINE) 产生相关的重组分子机制

• 批准号: 08280209
• 负责人: 岡田 典弘
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: Tokyo Institute of Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08280209/
• 关键词: SINE; ヘビクビガメ; レトロトランスポゾン; 逆転写酵素; PCR法

SINE生成の組換え反応を理解することは、高等生物における未知の組換え機構の発見や、あるいは既知の組換え反応系が全く異なる現象へ転用されている事実を明らかにすることにつながるものと考え、以下の実験を行った。1.ヘビクビガメのゲノムからのCR1様レトロトランスポゾンの単離SINEに逆転写酵素を供給していると考えられる、CR1様因子の活性型遺伝子をヘビクビガメのゲノムライブラリーより単離する。これらの中から全長を保持した遺伝子をスクリーニングする。この実験を行うには、プローブに用いるためにCR5′上流領域の配列情報が必要であるが、全長がクローニングされていないため、カセットPCR法を用いて、ヘビクビガメゲノム中のCR1の3′末端から上流に向かってウォーキングを行い、この情報を基にプローブを作製し、目的の遺伝子を単離した。2.CR1がコードする逆転写酵素の発現、精製3.CR1逆転写酵素によるSINEの認識特性の解析実験は現在も進行中であり、今後も引き続きデータが増えることが予想され、さらなる検討を加えていく予定である。

了解产生 SINE 的重组反应将有助于发现高等生物中未知的重组机制，或者导致已知的重组反应系统被用于完全不同的现象。考虑到这一点，我进行了以下实验。 1.从蛇颈龟基因组中分离CR1样逆转录转座子将从蛇颈龟基因组文库中分离出CR1样因子的活性基因，该基因被认为为SINE提供逆转录酶。其中，筛选保留其全长的基因。为了进行本实验，需要CR5'上游区域的序列信息作为探针，但由于尚未克隆全长，我们使用盒式PCR来鉴定蛇颈龟基因组中CR1的3'区域我们从末端向上游走，根据这些信息创建了一个探针，并分离出感兴趣的基因。 2. CR1编码的逆转录酶的表达和纯化 3. 目前正在进行分析CR1逆转录酶对SINE的识别特征的实验，预计未来数据会不断增加，因此将进一步研究我正计划去那里。