生殖細胞分化過程におけるSINEの分子機構

SINEs在生殖细胞分化过程中的分子机制

• 批准号: 08275212
• 负责人: 岡田 典弘
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Tokyo Institute of Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08275212/
• 关键词: RNA; SINE; ウナギ; 逆転写酵素; アミノ酸; 塩基配列; PCR法

生殖細胞中でRNAを介した転移因子が、実際に転移する現象は未だ報告されておらず、精巣分化過程を人為的に制御できるウナギの精巣を用いることで、SINEの転写及び、逆転写の機構が解明されれば、他に類のない画期的な報告ができるものと考え、次の通り実験を行った。ウナギのSINE配列を含んだDNA断片を単離して、塩基配列を決定、ウナギ精巣の各分化段階におけるSINEユニットの転写産物の存在を、ラジオアイソトープ存在下でのプライマー伸長反応を反応産物の電気泳動により検出した。また各分化段階のサンプルより粗タンパク質を抽出して、逆転写酵素活性測定を行い発現時期を特定、その活性を指標として逆転写酵素の精製を進め、アミノ酸の部分配列を決定、その配列より類推される塩基配列をプライマーとしてPCR法により逆転写酵素遺伝子の塩基配列を決定した。実験は現在も進行中であり、中にはサンプルを取り寄せている最中のものもあり、今後様々なデータも今後増えることが予想され、引き続き検討を加えていくことが必要である。

RNA介导的转座元件实际易位到生殖细胞中尚未有报道，并且通过使用可以人为控制睾丸分化过程的鳗鱼睾丸，可以改善SINE的转录和逆转录。如果我们能够阐明其中的机制，我们就能够做出一份独特且具有开创性的报告，因此我们进行了以下实验。我们分离了含有鳗鱼SINE序列的DNA片段，确定了其碱基序列，确定了鳗鱼睾丸分化各阶段SINE单元转录物的存在，在放射性同位素存在下进行了引物延伸反应，并对反应产物进行了电泳检测到。此外，我们从每个分化阶段的样品中提取粗蛋白，测量逆转录酶活性，鉴定表达时期，以活性为指标纯化逆转录酶，确定氨基酸部分序列，并根据该序列进行类比。使用获得的核苷酸序列作为引物，通过PCR确定逆转录酶基因的核苷酸序列。实验还在进行中，部分样品还在订购中，预计未来各种数据还会增加，所以有必要继续调查。

项目成果

Norihiro Okada,Mitsuhiro Hamada: "The 3′Ends of tRNA-Derived SINEs Originated from the 3′Ends of LINEs:A New Example from the Bovine Genome" J.Mol.Evol.43(in press). (1997)

Norihiro Okada、Mitsuhiro Hamada：“tRNA 衍生的 SINE 的 3 末端源自 LINE 的 3 末端：来自牛基因组的新例子”J.Mol.Evol.43（出版中）。