MAPキナーゼカスケードによる転写因子の活性制御機構

MAP 激酶级联调节转录因子活性

基本信息

批准号：
08250204
负责人：
入江賢児
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08250204/
关键词：
MAPキナーゼシグナル伝達転写因子 TGF-β TAK1

项目摘要

MAPキナーゼカスケードの解析から、以下のような成果を得た。酵母のMAPキナーゼであるMpk1の下流で機能するRLM1遺伝子は、serum response factorと高い相同性を示すタンパク質をコードしており、Rlm1はMpk1の下流で機能する転写因子であると考えられる。Rlm1の転写活性化能がMpk1に依存しているかを調べるため、LexAとの融合タンパク質を構築した。lexAオペレーターの下流にlacZ遺伝子を連結したレポーター遺伝子を用いて、野生型株とmpk1変異株におけるLexA-Rlm1の転写活性化能を検討した結果、Rlm1の転写活性化能はMpk1に依存していることが明かとなった。また、in vitroでRlm1がMpk1によりリン酸化されることがわかった。以上のことから、Rlm1はMpk1シグナル伝達系において、Mpk1によるリン酸化による転写活性化能が制御される転写因子であると考えられる。我々はこれまでに、TGF-βのシグナル伝達に関与する新規のMAPKKKであるTAK1を分離している。Two-hybridスクリーニングにより、TAK1と相互作用する因子TAB1,TAB2を同定した。このうちTAB1はTAK1のキナーゼ触媒領域に、TAB2はC末側の制御領域に結合する。TAB1は、共発現によりTAK1のキナーゼ活性を上昇させること、およびTGF-β刺激に応答したPAI-1(Plasminogen activator inhibitor type 1)遺伝子の発現を促進することから、TAK1の活性化因子として機能すると考えられる。

从MAP激酶级联反应的分析中获得以下结果。 RLM1基因在MPK1（一种酵母MAP激酶）下游起作用的RLM1基因编码一种蛋白质，该蛋白质与血清反应因子表现出很高的同源性，而RLM1被认为是MPK1下游功能的转录因子。为了研究RLM1的转录激活能力是否取决于MPK1，构建了带有Lexa的融合蛋白。使用与Lexa操作员下游的LACZ基因相关的报告基因，我们研究了LEXA-RLM1在野生型菌株和MPK1突变株中的转录激活能力，并发现RLM1的转录激活能力依赖于MPK1。还发现RLM1在体外被MPK1磷酸化。从上面可以看出，RLM1是MPK1信号系统中的转录因子，它调节通过MPK1磷酸化激活转录的能力。到目前为止，我们已经孤立了TAK1，这是一种参与TGF-β信号传导的新型MAPKKK。两个杂交筛选确定了与TAK1相互作用的因子TAB1和TAB2。其中，TAB1与TAK1的激酶催化区域结合，TAB2与C末端调节区域结合。 TAB1被认为是TAK1的激活剂，因为它通过共表达增加了TAK1的激酶活性，并促进了PAI-1（纤溶酶原激活剂抑制剂1型）基因的表达，以响应TGF-β刺激。