酵母ASH1 mRNAの局在およびmRNAレベルでの制御機構

酵母ASH1 mRNA的定位及mRNA水平的调控机制

基本信息

批准号：
11155214
负责人：
入江賢児
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11155214/
关键词：
酵母ショウジョウバエ mRNA ASH1 MAPキナーゼ oskar

项目摘要

酵母およびショウジョウバエを用いたmRNA局在機構の解析から以下の知見を得た。酵母において、ASH1 mRNAの娘細胞の先端への局在を顕微鏡下で観察する系を確立した。この系を用いたスクリーニングにより、ASH1 mRNAの局在にはこれまで知られているMYO4,BNI1に加え、アクチン結合タンパク質トロポミオシンTPM1,ポリA結合タンパク質PAB1,基礎転写因子TAF145,新規の遺伝子YML114,細胞極性の確立に関与するBUD6,SPA2が関与することを明らかにした。さらに、RNA結合モチーフをもつMPT5遺伝子がASH1の翻訳制御に関与するという予備的結果を得た。今後、これらの系を用いて、さらに多くの変異株の分離、解析することにより、mRNA局在の分子機構およびASH1 mRNAの翻訳レベルでの制御機構を明らかにする予定である。次に、ショウジョウバエよりMAPキナーゼ(MARK)D-p38b、MARKキナーゼ(MAPKK)licorne(lic)/D-MKK3を分離し、Noselliらとの共同研究で、licが卵形成過程の非対称性の確立に機能することを明らかにした。すなわちlic変異体では卵殻の背腹軸の極性に異常がみられ、野生型に比べ球形で小さい卵をつくる。また、lic変異体の胚は、極細胞の数が減少しており、野生型では通常胚後端部でみられるoskar mRNAの局在に異常がみられた。oskar mRNAの局在は極細胞が正常につくられるために必須であり、Lic-p38 MAPKカスケードはoskar mRNAの局在を制御していると考えられる。

使用酵母和果蝇对 mRNA 定位机制进行分析，得到以下结果。在酵母中，我们建立了一个系统来在显微镜下观察 ASH1 mRNA 在子细胞尖端的定位。使用该系统的筛选显示，除了已知参与 ASH1 mRNA 定位的 MYO4 和 BNI1 之外，肌动蛋白结合蛋白原肌球蛋白 TPM1、多聚腺苷酸结合蛋白 PAB1、基础转录因子 TAF145、新基因YML114 和细胞据透露，BUD6 和 SPA2 参与建立极性。此外，我们初步结果表明MPT5基因具有RNA结合基序，参与ASH1的翻译调控。未来，我们计划利用这些系统分离和分析更多的突变株，以阐明ASH1 mRNA定位的分子机制和翻译水平的控制机制。接下来，我们从果蝇中分离出了 MAP 激酶（MARK）D-p38b 和 MARK 激酶（MAPKK）licorne(lic)/D-MKK3，并与 Noselli 等人联合研究，发现 lic 在建立不对称性方面发挥了作用。卵子发生过程表明它有效。换句话说，lic突变体的蛋壳背腹轴极性异常，产生的蛋呈球形且比野生型小。此外，lic突变胚胎的极细胞数量减少，并且观察到通常在野生型胚胎后端发现的oskar mRNA定位异常。 oskar mRNA 的定位对于极细胞的正常形成至关重要，并且 Lic-p38 MAPK 级联被认为控制 oskar mRNA 的定位。