チトクロムbc型NOリダクターゼによるNOの変換機構

细胞色素bc型NO还原酶转化NO的机制

基本信息

批准号：
08249214
负责人：
櫻井武
金额：
$ 1.47万
依托单位：
Okazaki National Research Institutes
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08249214/
关键词：
NO NOリダクターゼチトクロム ESR MCD 膜タンパクコンプレックスレドックス

项目摘要

Al cali genes xylosoxi dans GIFU 1051 を嫌気条件で培養し、膜成分をドデシルマルトシドで処理することによって、可溶化したのち、DEAEセルロース、ヒドロキシアパタイト、セファデックスなどを用いたカラムクロマトを行うことによって、NOリダクターゼを単離した。酵素活性の検出はガスクロを用いる方法を開発して、酵素精製を行った。次いで、吸収、MCD、ESRスペクトルなどを測定することによって、NOリダクターゼをキャラクタライズした。その結果、この酵素はチトクロムbサブユニットとチトクロムcサブユニットのコンプレックスであることがわかった。さらに、ヘムの電子状態として、高スピンと低スピンの成分があることを明らかにした。ついで、NOリダクターゼのレドックスカップルであると考えられる、可溶性タンパク、チトクロムc553を単離して、吸収、MCD、ESRスペクトルなどによって、ヘムの電子状態について詳しく検討した。このような研究によりAl cali genes xylosoxidans GIFU 1051 にNOリダクターゼが存在することを確認し、基本的なキャラクタリゼーションを行ったが、この酵素が著しく不安定であるので、より詳細な研究を進めるために、大量に安定な酵素を得ることをめざして、様々の脱窒菌をスクリーニングテストした。その結果、Par acoccus hal odenifitricansが最適であることを突き止め、精製法を確立した。また、Al cali genes xylosoxi dans GIFU 1051 と同じレベルの分光学的キャラクタリゼーションを行った。現在、ゲノムクローニングを目指して、ペプチドシーケンスを部分的に調べているところである。

在厌氧条件下培养了木糖基因木氧化物dans gifu 1051，并通过用十二烷基马尔替剂对膜成分溶解膜成分，然后通过使用Deaee，使用Deae的纤维素元素，Sephadex，Sephadex，Sephade iim进行纯化的圆柱形成分离膜成分，然后通过柱色谱分离还原酶。执行。然后通过测量吸收，MCD，ESR光谱等来表征NO还原酶。结果表明，这种酶是细胞色素B和细胞色素c亚基之间的复合物。此外，揭示了血红素的电子状态包括高旋转和低自旋组件。然后，被认为是无还原酶的氧化还原夫妇的可溶性蛋白C553，然后被分离出来，并通过吸收，MCD，ESR谱系详细检查了血红素的电子状态。这项研究证实了木糖基氧化物GIFU 1051中没有还原酶的存在并进行了基本表征，但是由于该酶明显不稳定，因此对各种硝化细菌进行了筛选并测试以获得大量稳定的稳定酶，以便进一步进一步详细的研究。结果，发现Par acoccus hal odenifitricans是最好的，并且建立了纯化方法。此外，光谱表征在与木氧基Dans Gifu 1051的水平相同的水平上进行。目前，我们正在部分检查肽序列，其目的是基因组克隆的目的。