ペプチド抗原+MHC分子を認識するTCRの解析

识别肽抗原+MHC分子的TCR分析

基本信息

批准号：
06670341
负责人：
小笠原一誠
金额：
$ 1.09万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06670341/
关键词：
TCR MHC アグレトープエピトープ三分子複合体

项目摘要

T細胞が抗原を認識し反応するためには、TCR、MHC分子、抗原ペプチド断片よりなる三分子複合体の形成が必要である。従って、この三分子複合体を分子レベルで解析すれば、免疫反応を人為的に調節できるようになると期待される。我々は、これまでにハトチトクロームcの43-58残基よりなるペプチドp43-58上の、MHCクラスII分子と結合する部位(アグレトープ)は46および54番残基であり、TCRと結合する部位(エピトープ)は47から53番残基であることを報告してきた。今回は、この47から53番残基に対応するTCR上の部位の同定を試み、47から53番残基を順次リジン(K)に置換したペプチド群(47K,48K,49K,50K,51K,52K,53E)を作製した。リジンは正の電荷をもつので、対応するTCR上の残基は負の電荷を持つものに変わると考えられる。p43-58の53番残基に関しては、元々53番残基はリジンであるので、反対の電荷をもつグルタミン酸に置換して、53Eを作製した。47K,48K,49K,51K,52K,53EでB10マウスを免疫して、T cell lineを作製し、TCRβ鎖の可変域であるVβに対する抗体を使用して、これらのT cell lineのVβについて検索した。ほとんどすべてのT cell lineは、Vβ8かVβ14を使用していた。53E特異的T cell lineだけが、Vβ8かVβ14以外にも多数の他のVβを使用していた。このことから、53番残基はVβに結合するかVβに影響を与えやすいことが判明した。これまでに、抗原ペプチド上の1残基がTCRβ鎖の可変域と結合するという報告はない。従って、我々の抗原系は、新しい三分子複合体モデルを提供すると考えられる。

T细胞为了识别抗原并发生反应，需要形成由TCR、MHC分子和抗原肽片段组成的三元复合物。因此，预计通过在分子水平上分析这种三分子复合物，将有可能人为调节免疫反应。我们之前发现，由鸽子细胞色素c的残基43-58组成的肽p43-58上与MHC II类分子结合的位点（agretope）是残基46和54，也是与TCR结合的位点。（表位）据报道为残基 47 至 53。这次，我们尝试鉴定TCR上对应于残基47至53的位点，并产生了一组肽（47K、48K、49K、50K、51K、52K、53E）。由于赖氨酸带正电荷，TCR上相应的残基会变成带负电荷的残基。关于p43-58的残基53，由于残基53最初是赖氨酸，因此将其用具有相反电荷的谷氨酸取代以产生53E。通过使用 47K、48K、49K、51K、52K 和 53E 免疫 B10 小鼠来创建 T 细胞系，并使用针对 Vβ 的抗体（即 TCRβ 链的可变区）在这些 T 细胞系中搜索 Vβ。几乎所有 T 细胞系都使用 Vβ8 或 Vβ14。只有 53E 特异性 T 细胞系使用了除 Vβ8 或 Vβ14 之外的许多其他 Vβ。这表明残基 53 要么与 Vβ 结合，要么倾向于对 Vβ 产生影响。迄今为止，还没有抗原肽上的单个残基与TCR β链可变区结合的报道。因此，我们的抗原系统似乎提供了一种新的三分子复合物模型。