ホルモン依存性プログラム細胞死の開発と応用

激素依赖性程序性细胞死亡的开发及应用

基本信息

批准号：
06670167
负责人：
垣塚彰
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1研究目的本研究は、プログラム細胞死を脂溶性ホルモンにより自由にコントロールしうるシステムを作り出すこと,このシステムを応用発展させることにより、全く新しい癌の遺伝子療法を確立することを目的としている。さらにこのシステムと動物への遺伝子導入法を組み合わせることにより、種々の変性疾患モデル動物の作製を試みる。2研究成果fas抗原受容体のプログラム細胞死に必須な蛋白領域とエストロジェンホルモン受容体もしくはレチノイン酸受容体のリガンド結合領域を結合した融合蛋白質をコードする融合遺伝子を作出し、fas抗原に感受性があることが知られているL929細胞及びHeLa細胞に恒常的に発現するように導入した。得られた細胞株に、導入した融合遺伝子の受容体部分に対応するリガンド(エストラヂオール、レチノイン酸)を加えたところ、どちらの細胞においても0.1nMのエストラヂオール、10nMのレチノイン酸で処理後約3時間ですべての細胞が死滅することが観察された。つまり、現時点で少なくとも培養細胞レベルにおいて脂溶性ホルモンによりプログラム細胞死を自由にコントロールしうるシステムの確立に成功した。現在、遺伝子導入したL929細胞及びHeLa細胞をヌードマウスに移植しin vivoにおいても細胞死が脂溶性ホルモンにより誘導されることを確認する実験を行っている。また、このシステムに感受性のあるヒト癌細胞株を系統的にスクリーニングしているところであり、これにより将来的に治療の標的となりうる癌の種類が特定できると考えている。さらに、in vivoの癌細胞に効率よく融合遺伝子を導入するために、レトロウィルス、アデノウィルス、リポゾームを用いる方法を検討している。また、これらの融合遺伝子を小脳特異的なプロモーターの支配下に繋いだ遺伝子を導入したトランスジェニック・マウスを作りつつある。このマウスに脂溶性ホルモンを与えることにより、小脳変性疾患のモデルマウスの作出を試みる。

1。研究目标本研究旨在创建一个系统，该系统允许通过脂肪释放激素自由控制编程的细胞死亡，并通过应用和开发该系统来建立一种全新的癌症基因疗法。此外，通过将该系统与将基因转移到动物中的方法相结合，我们试图创建各种动物模型动物。 2研究结果是一种编码融合蛋白的融合基因，该融合蛋白结合了FAS抗原受体的编程细胞死亡和雌激素激素受体或视黄酸受体的配体结合区域必不可少的蛋白质区域，并产生了fas抗原受体，并被引入了在L929和Hela细胞中的构造表达，已知对Fas Antimen敏感。当配对与引入融合基因的受体部分相对应的配体（雌二醇，视黄酸）被添加到所得细胞系中时，两个细胞中用0.1 nm雌二醇和10 nm视黄酸治疗后，所有细胞在两个细胞中的治疗后约3小时死亡。换句话说，目前，它已经成功地建立了一个系统，该系统至少在培养的细胞水平上使用脂肪溶液激素可以自由控制编程的细胞死亡。目前，我们正在向移植转基因L929细胞和HeLa细胞进行实验，以确认即使在体内也会由脂肪溶液激素诱导细胞死亡。我们还在系统地筛选容易受到该系统的人类癌细胞系，我们认为这将使我们能够识别将来可能成为治疗靶标的癌症的类型。此外，正在研究使用逆转录病毒，腺病毒和脂质体的方法有效地将融合基因引入体内癌细胞。此外，通过引入小脑特异性启动子控制这些融合基因的基因来创建转基因小鼠。通过给小鼠一种脂肪溶剂激素，我们试图为小脑退行性疾病创建模型小鼠。