VCPのATPase活性を阻害する物質の検索

寻找抑制VCP ATP酶活性的物质

基本信息

批准号：
17659092
负责人：
垣塚彰
金额：
$ 2.24万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17659092/
关键词：
VCP AAA ATPase 活性阻害剤腺癌扁平上皮癌

项目摘要

VCPは、AAAファミリーのATPaseで、細胞周期の進行やERADなどの蛋白質分解、各種オルガネラの膜の形成に重要な働きを持つことが示されている。一方、ほとんど全てのヒトの線描や扁平上皮癌でその発現が亢進しており、発癌状態とVCPの活性亢進が強く関連していることが示唆されている。実際、VCPの発現亢進が癌の悪性度、進行、予後との相関を示唆する臨床的なデータの報告も見受けられる。また、VCPはlkBの分解を介してNFkBシグナルを増強することで、抗細胞死作用を持つ、癌細胞の生存を促進するという報告もある。我々は、ある種の植物エキスにVCPの阻害活性が含まれることをみいだしたので、この分子を精製・同定することを試みた。第一段階として、Silica columnに対して移動相としてクロロホルムを用いた固相抽出を行い、第二段階では、CVの順相columnに対して移動相としてジクロロメタンを用いたHPLC、第三段階でRP18の逆相colurmnに対して移動相としてアセトニトリルを用いたHPLC、第四、第五段階では、C18の逆相columnに対して移動相としてアセトニトリルを用いたHPLCを行い、VCPのATPase活性を阻害する成分を精製することに成功した。この物質は、分子量が548であった。この一連の操作を約200回繰り返し、約1.5mgの精製物を得、得られた物質に対してNMRによる構造解析により、この物質の主要骨格を決定することができた。今後、VCPの多岐にわたる機能のうち、この阻害剤の濃度の違いによって、どのような特異性がみられるかを解析し、がんの治療を中心に応用方法を探っていきたい。

VCP是AAA家族的ATPase，已被证明在细胞周期进展，蛋白水解（例如ERAD）和各种细胞器中的膜形成中具有重要作用。另一方面，几乎所有人类系列图纸和鳞状细胞癌都会增加表达，这表明致癌状态和VCP活性增加密切相关。实际上，我们还报道了临床数据，表明VCP表达的增加与癌症恶性肿瘤，进展和预后相关。也有报道称，VCP通过LKB的降解增强了NFKB信号传导，LKB具有抗细胞死亡作用并促进癌细胞的存活。我们发现某些植物提取物包含VCP的抑制活性，因此我们试图纯化和识别该分子。作为第一步，使用氯仿作为二氧化硅柱的流动阶段进行固相提取，在第二步中，使用二氯甲烷作为CV正常列的流动阶段进行HPLC，使用乙腈作为流动阶段，使用乙二烯阶段进行HPLC，用于使用RP18和FIFCER的相对阶段的流动阶段进行四阶段，并进行了四分之一的步骤。对于C18的反向相位列，在第二步中，使用乙腈作为C18反向相列的流动相进行HPLC，在第二步中，成功纯化了VCP ATPase活性的第二步。该材料的分子量为548。重复了大约200次，以获得约1.5 mg的纯化产物，并且所得材料能够通过NMR分析来确定该材料的主要骨架。将来，我们将根据该抑制剂的浓度从VCP的广泛功能中分析什么特异性，并探索主要在癌症治疗中的应用。