臍帯血造血幹細胞を用いた骨髄再構築(臍帯血移植)への基礎的研究

利用脐带血造血干细胞进行骨髓重建（脐带血移植）的基础研究

基本信息

批准号：
04670599
负责人：
上田一博
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Hiroshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1992
资助国家：
日本
起止时间：
1992 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04670599/
关键词：
臍帯血造血幹細胞 CD34抗原造血因子

项目摘要

臍帯血は多能性造血細胞に富んでいるため、造血細胞の研究ならびに臨床応用に利用されている。本年度は臍帯血より造血幹細胞をモノクローナル抗体を用いて純化することと、各種造血因子による液体培養での造血細胞の増幅について研究を行った。(1)造血細胞は通常の比重遠心後にAIS社のsoybean agglutininならびにCD34抗原コートフラスコを用いて純化した。得られた細胞数は骨髄では約1%、その純度は80%以上であった。一方臍帯血では細胞数では0.2〜1%とかなりの個人差がみられたが、その純度は骨髄同様80%以上であった。(2)純化前と後(CD34陽性細胞)における各種造血因子によるコロニー形成能は軟寒天培養法で検討した。コロニー形成細胞数は純化前と後で100倍濃縮されており、これはCD34細胞の比率とよく相関していた。しかし、臍帯血細胞では骨髄細胞に比べてかなりのばらつきが存在した。臍帯血におけるheterogeneityの詳細は不明であるが、今後臨床応用をすすめていくうえで重要な問題点と思われた。(3)純化した臍帯血造血幹細胞を各種造血因子と短期間の液体培養を行い、その後のコロニー形成細胞数の変化を検討した。G‐CSF,SCFでは2〜3週間をピークとし、コロニー形成細胞数は10〜50倍までに増幅されるが、他の造血因子(GM‐CSF,IL‐3,IL‐6)では増幅作用はほとんど認められなかった。G‐CSF,SCFの増幅作用は4〜6週までわずかながら認めらるが細胞数の減少が著明となり、全体のコロニー形成細胞の絶対数は減少していることとなった。現在、短期間で増幅された造血細胞での骨髄再構築が可能かどうかをDextcr培養を用いて検討をおこなっている。

脐带血富含多能造血细胞，因此可用于造血细胞研究和临床应用。今年，我们进行了使用单克隆抗体从脐带血中纯化造血干细胞以及使用各种造血因子在液体培养物中扩增造血细胞的研究。 (1)常规密度离心后，使用来自AIS的大豆凝集素和CD34抗原包被的烧瓶纯化造血细胞。获得的细胞数量约为骨髓的1%，纯度超过80%。另一方面，在脐带血中，虽然细胞数量存在相当大的个体差异，从0.2%到1%不等，但其纯度却超过80%，与骨髓相似。 (2)软琼脂培养检测纯化前后各种造血因子(CD34阳性细胞)的集落形成能力。纯化前后集落形成细胞的数量富集了100倍，这与CD34细胞的比例密切相关。然而，与骨髓细胞相比，脐带血细胞存在相当大的变异性。尽管脐带血异质性的细节尚不清楚，但这似乎是未来临床应用的一个重要问题。 (3)将纯化的脐带血造血干细胞与各种造血因子一起在液体中进行短时间培养，检查其后集落形成细胞数的变化。在G-CSF和SCF中，集落形成细胞的数量在2至3周后扩增10至50倍，但在其他造血因子（GM-CSF、IL-3、IL-6）中，集落形成细胞的数量形成细胞几乎未被识别。虽然G-CSF和SCF在4至6周时观察到轻微的放大作用，但细胞数量明显减少，集落形成细胞的总体绝对数量减少。我们目前正在研究是否可以使用Dextcr培养物在短时间内扩增造血细胞来进行骨髓重建。