増幅DNAを用いた残存白血病細胞検出の基礎的研究

利用扩增DNA检测残留白血病细胞的基础研究

基本信息

批准号：
03670494
负责人：
上田一博
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Hiroshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1991
资助国家：
日本
起止时间：
1991 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-03670494/
关键词：
ALL CDRIII Talー1

项目摘要

小児急性リンパ性白血症のうち細胞形態、細胞表面マ-カ-、染色体検査がなされ、経時的にDNAの抽出が行なわれている15症例を対象とした。初診時のDNAについて免疫グルブリン遺伝子(JH,Cκ,Cλ)とT細胞レセプタ-遺伝子(TCRα,TCRβ,TCRγ)の再構成をサザンブロット法で検討した。表面抗原検査よりB細胞起源の症例はすべて免疫グロブリン遺伝子の再構成が認められたため、個々の症例について免疫グロブリン重鎖の可変領域(V_H)と結合領域(J_H)のDNAをプライマ-として白血病細胞特異的CDRIII遺伝子のDNA塩基配列の決定を試みた。しかし、PCRを用いた白血病細胞特異的CDRIII遺伝子の塩基配列の決定はPCRの感度によるものか、かなりの夾雑物のために1例のみCDRIIIの塩基配列が決定出来た。本症例において初診時より保存されたDNAを用いたPCR法での残存白血病細胞の有無を1年の経過で検討した。形態学的、染色体検査では完全寛解を維持しているものの、PCRでは絶えず陽性を示していた。本方法の有用性については今後の臨床的経過との関係を詳細に検討しなければならないが,個々の症例におけるCDRIIIの申基配列の困難さはB細胞系ALLの残存白血病細胞の検出には限界があるものと思われた。一方、T細胞起源のALL6例ではT細胞レセプタ-遺伝子の再構成が5例で認められた。近年、TーALLよりtalー1遺伝子がクロ-ニングされ、小児TーALLでは約25%に再構成がみられる。talー1遺伝子の塩基配列は決定されているので、これをもとにプライマ-の作製を行なった。我々のTーALL症例でもtalー1遺伝子の再構成の認められる症例ではこのプライマ-を用いてPCR法での残存白血病細胞の検出が可能と考え、現在あわせて検討を継続している。

在小儿急性淋巴白血病中，进行了细胞形式，细胞表面肿块和染色体检测，并随时间提取DNA。通过Southern Brot方法检查了第一次咨询中DNA的重建，以重建免疫脑基因（JH，Cκ，Cλ）和T细胞受体（TCRα，TCRβ，TCRγ）。由于B细胞中的所有B细胞起源病例均已通过表面抗原测试重建，因此可变面积（V_H）的DNA和免疫球蛋白重链（J_H）的结合面积（J_H）在单个情况下都是引物底漆。我们试图确定特定CDRIII基因的DNA碱基序列。然而，使用PCR的白血病细胞特异性CDRIII基因的碱基序列的测定是由于PCR的敏感性，或者仅确定一个CDRIII碱基序列，以确定相当多的污染物。在这种情况下，使用第一次咨询中存储的DNA在PCR方法中存在或不存在剩余的白血病细胞。尽管在形态学和染色体测试中保持了完全缓解，但PCR仍表现出阳性。有必要详细检查该方法的有用性与将来的临床进展关系，但是在单个情况下，CDRIII主张的难度是检测B细胞系统的剩余白血病细胞。。另一方面，在六个T细胞的情况下，在五个情况下发现了T细胞接受者重建的T细胞接受者。近年来，TAL-1基因是T-All的黑色，它已被重建至大约25％的儿童T-All。由于已经确定了TAL-1基因的碱基序列，因此基于此基于基础的Prima。在我们的T-ALL情况下，我们认为使用该基调的PCR方法中，TAL-1基因重建剂的重建被认为可以检测其余的白血病细胞，并且我们正在继续研究。