骨髄細胞の分化におけるサイクリン複合体の役割

细胞周期蛋白复合物在骨髓细胞分化中的作用

基本信息

批准号：
04670292
负责人：
富永明
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Kumamoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1992
资助国家：
日本
起止时间：
1992 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

正常マウス骨髄細胞より、Whitlock-Witteの培養法でリンパ球様細胞株を得、さらに骨髄支持細胞株ST2上でIL-5存在下に培養を続けることにより、ST2とIL-5の両方に依存性の細胞株を得た。この細胞株のうち免疫グロブリン遺伝子の再構成の起こっていない細胞株を用いて今回の実験を計画をした。この細胞株は、IL-3,IL-5に反応して分裂し、GM-CSFに反応してマクロファージに分化する。これらの細胞株のうち、J7とJ13の2種の細胞株の性状を解析した。これらの細胞株はIL-5に依存性であり、さらに骨髄支持細胞にも依存性を示す。この骨髄支持細胞依存性の一部はc-kitのリガンドであるstem cell factorへの依存性で説明できる。J7は免疫グロブリン遺伝子の再構成が起こっておらずproB細胞と思われる。J13は片方の染色体でDJの再構成が起こっている。J7、J13ともにλ5、mb-1、B220のmRNAを発現しており、しかもsterile μ mRNAの発現もある。特に、これらB/マクロファージ系の細胞がGM-CSFに反応してマクロファージに分化する過程でのpRb、G1サイクリン複合体の変化を追究中である。J7をIL-5と共に培養した場合とGM-CSFで培養した場合とで坑pRB抗体による免疫沈降物を比較検討している。また、サイクリンD1、D2に対する抗体を作製したところで、CDK4に対する抗体を作製すべく免疫を続けているところである。また、グルタチオンS-トランスフェラーゼに融合したこれら蛋白質を作製中である。

通过使用Whitlock-Witte培养方法从正常小鼠骨髓细胞中获得淋巴细胞样细胞系，然后在IL-5存在下在髓样支持细胞系ST2上进行培养，从而导致细胞系依赖于ST2和IL-5。该实验是使用这些细胞系中没有免疫球蛋白基因重排的细胞系进行了计划的。该细胞系对IL-3和IL-5的响应分裂，并根据GM-CSF区分巨噬细胞。在这些细胞系中，分析了两种细胞系J7和J13的性能。这些细胞系具有IL-5依赖性，也取决于骨髓支撑细胞。骨髓支撑细胞的这种依赖性可以部分通过其对干细胞因子（C-KIT的配体）的依赖性来解释。 J7不接受免疫球蛋白基因重排，并且似乎是一个概率细胞。 J13在一个染色体上进行DJ重排。 J7和J13的λ5，MB-1和B220的mRNA都表达无菌μRNA。特别是，在这些B/巨噬细胞细胞的过程中，我们目前正在追求PRB和G1细胞周期蛋白复合物的变化，这些B/巨噬细胞因响应GM-CSF而分化为巨噬细胞。我们已经比较并检查了用抗PRB抗体培养的IL-5和GM-CSF培养的J7之间的免疫沉淀物与抗PRB抗体。此外，一旦产生了针对细胞周期蛋白D1和D2的抗体，它们将继续免疫它们以产生针对CDK4的抗体。此外，目前正在生产这些蛋白与谷胱甘肽S-转移酶融合的蛋白质。