オーガナイザー活性のあるホメオボックス遺伝子の細胞分化における役割

具有组织者活性的同源盒基因在细胞分化中的作用

基本信息

批准号：
05680617
负责人：
富永明
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Kumamoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05680617/
关键词：
ホメオボックスオーガナイザーグースコイド細胞分化

项目摘要

マウスgoosecoid染色体遺伝子はカリフォルニア大学のMartin Blum,Eddy M.De Robertis両博士から供与を受けた。この遺伝子はまだcDNAが単離されておらず、またその発現にも成功していない。このゲノム遺伝子の発現を困難にしているのは開始コドン上流域であると考え、295塩基対の上流域のうち250塩基対を削除した。削除した部分にはTATAboxがあり極めてGC塩基対が多い。マウスgoosecoid染色体遺伝子の上流域のTATAboxを含む部分を削除し、約50塩基対の上流域を含む約2100塩基対のゲノム遺伝子をハイグロマイシン耐性遺伝子を持つベクターのラウスサルコーマウイルスプロモーター下流に挿入し哺乳細胞での発現を試みている。このベクターでは蛋白質はヒスチジンが6個N端に結合して発現されるのでニッケルカラムを用いて精製できる。この遺伝子をCOS細胞へ燐酸カルシウム法により移入し、現在、ハイグロマイシン耐性株を選択した所である。また、TATAboxを含む上流域を削除したマウスgoosecoid染色体遺伝子をネオマイシン(G418)耐性遺伝子を持つベクターのサイトメガロウイルスプロモーター下流に挿入し、赤芽球系細胞にエレクトロポーレーション法により移入してネオマイシン耐性株を選択した。この細胞株はアクチビンへの反応性が低下していた。この原因としては、赤血球分化に必要な転写調節因子を抑えたり、あるいは細胞周期を加速する役割を果たしていることが考えられる。例えば、レチノブラストーマ蛋白質が赤血球分化に必要な転写調節因子と結合するのを妨げたり、増殖に必要な燐酸化型レチノブラストーマ蛋白質を相対的に増加させている事などが考えられる。

小鼠粘体染色体基因由DRS提供。加利福尼亚大学的Martin Blum和Eddy M. De Robertis。该基因尚未被分离出来，尚未成功表达。据认为，启动密码子的上游区域使表达变得困难，并且删除了295个碱基对上游区域的250个碱基对。已删除的部分是tatabox，具有大量的GC碱基对。删除了小鼠粘体染色体基因上游区域中含有tatabox的部分，并将约2100个碱基对基因组基因插入了大约50个碱基对的基因组基因，下游是在抗霉素抗性基因中以抗菌素抗性的细胞来表达MammalAmalAmalAmalAmalAmalAmalAmalAmalAmalAmalAmalAmalAmalAmalAmalAmalAmalAmalAmalAmalAmalAmalAmalAmalAmalAmalAmalAmalAmalAmalAmalAmmalAmalAmalAmalAmalAmalAmalAmalAmalAmalAmalAmalAmalAmalAmalAmalAmalAmalAmalAmalAmmalAmalAmalAmmalAmmalAmmalAmmalAmmalAmmalAmmal。在该载体中，蛋白质通过与N末端的六个组氨酸结合而表达，因此可以使用镍柱纯化。通过磷酸钙方法将该基因转移到COS细胞中，现在选择了抗瘤霉素菌株。此外，从含有tatabox的上游区域中删除的小鼠鹅叶染色体基因被插入了载有新霉素（G418）抗性基因的矢量促进剂的下游，并通过erythropt抗性细胞通过选择性抗性剂转移到选择性抗性。该细胞系对激活素的反应性降低。这可能是由于抑制了红细胞分化或加速细胞周期所需的转录调节剂引起的。例如，可以防止视网膜细胞蛋白与红细胞分化所需的转录调节剂结合，并且相对增加了磷酸化的磷酸化视网膜母细胞瘤蛋白。