肝小胞体膜の形成機構の研究

肝内质网膜形成机制的研究

基本信息

批准号：
03833024
负责人：
三原勝芳
金额：
$ 1.09万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1991
资助国家：
日本
起止时间：
1991 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-03833024/
关键词：
シグナルアンカ-ER 膜蛋白質

项目摘要

(1)シグナル/アンカ-の系統的解析我々はPー450分子のN末端に存在するシグナル/アンカ-の機能がN末端の荷電アミノ酸の数と疎水領域の長さとのバランスによって決定されることを推定していたが、今回N末端の荷電アミノ酸の数と疎水領域の長さとを系統的に変えた人工的シグナル/アンカ-を持つ蛋白質を18種類構築しERへの挿入様式をin vitroで解析し、この仮説を実証することに成功した。(2)膜透過停止配列(ST)の系統的解析ER膜を通過する蛋白質の分子内に疎水性アミノ酸に富む領域が存在すると膜透過はその部分で停止し蛋白分子は膜にアンカ-される。今回はロイシン、ロイシン/アラニン、アラニンより構成されるいろいろな長さのクラスタ-を分泌蛋白質分子の中に挿入したこれらの分子のER膜透過の様子を解析することによりST機能に必要な条件を検討した。ロイシンでは9残基の、またアラニンでは19残基クラスタ-で完全な停止が見られた。またSTのC末端側に塩基性アミノ酸が存在するとST機能が増強されることも分かった。(3)カルボキシエステラ-ゼの細胞内局在従来カルボキシエステラ-ゼはすべてER内腔にのみ局在するものと考えられていたが、我々がラット肝より単離したcDNAがコ-ドするカルボキシエステラ-ゼのC末端にはER局在化のコンセンサス配列が見られなかった。このcDNAをCOS細胞に導入し、発現した蛋白質の細胞内局在を検討したところ、極めて速やかに細胞外へ分泌され、且つ複合型の糖修飾を受けていることが分かった。一方、分泌型カルボキシエステラ-ゼのC末端部分を別のタイプのエステラ-ゼのC末端部で置換したものはERにとどまっていた。さらにラット血清中にかなりの量の複合糖型カルボキシエステラ-ゼが存在することを見いだした。

(1)信号/锚的系统分析我们发现P-450分子N端的信号/锚的功能是由N端带电氨基酸数量与带电氨基酸数量之间的平衡决定的。然而，这一次，我们构建了 18 种带有人工信号/锚的蛋白质，系统地改变了 N 末端带电氨基酸的数量和疏水区的长度，并研究了插入模式我们成功地分析并验证了这一假设。 (2) 膜渗透终止序列（ST）的系统分析如果通过内质网膜的蛋白质分子中存在富含疏水性氨基酸的区域，则膜渗透在该区域停止，蛋白质分子被锚定在膜。这次，我们将由亮氨酸、亮氨酸/丙氨酸和丙氨酸组成的各种长度的簇插入到分泌蛋白分子中，并分析这些分子穿过内质网膜的渗透性，以确定ST功能所需的条件。在亮氨酸的 9 个残基处观察到完全终止，在丙氨酸的 19 个残基簇处观察到完全终止。还发现 ST C 末端碱性氨基酸的存在增强了 ST 功能。 (3) 羧酸酯酶的细胞内定位以前，所有的羧酸酯酶都被认为只定位于 ER 腔，但我们发现从大鼠肝脏分离的 cDNA 编码的 cDNA 在 ER 定位的 C 端没有发现一致的序列。酯酶。当将该cDNA导入COS细胞并检查表达蛋白的细胞内定位时，发现它极快地分泌到细胞外并进行复杂的糖基化。另一方面，当分泌型羧酸酯酶的C端部分被另一种酯酶的C端部分取代时，它保留在ER中。此外，我们发现大鼠血清中存在大量的复合糖苷羧酸酯酶。