MSF/14-3-3蛋白質及びその標的蛋白質との複合体の構造解析

MSF/14-3-3蛋白及其与靶蛋白复合物的结构分析

基本信息

批准号：
08260217
负责人：
三原勝芳
金额：
$ 1.54万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08260217/
关键词：
ミトコンドリア蛋白質輸送 14-3-3蛋白質分子シャペロン Hsp70 輸送促進因子

项目摘要

ラット肝ミトコンドリアへの前駆体蛋白質の輸送過程を解析し、さらにミトコンドリア輸送促進因子MSFと前駆体蛋白質の相互作用の解析を行った。【1】ミトコンドリアへの蛋白質輸送には細胞質とマトリクスのATPと内膜の膜ポテンシャルが要求される。これらのエネルギーを順次除去して輸送を行うことにより。前駆体蛋白質がマトリクスに到達するまでに6種類の輸送中間体を効率よく捕捉する系を組むことに成功し、それらの中間体の性質の解析をおこなった。これによって、外膜と内膜の輸送装置を生化学的に解析する道がひらかれた。【2】ミトコンドリア輸送には細胞質シャペロンであるMSFとHsp70が必要であることを明かにしてきたが、今回は外膜受容体Tom70、Tom20の細胞質領域、Hsp70、MSF、3種類の前駆体蛋白質すべてを精製し、これらを用いて前駆体と受容体の相互作用を水溶液系で解析した。その結果、(1)Tom70への前駆体の結合には、その種類にかかわらずMSFが必要であり、Tom20への前駆体の結合にはHsp70が必要であること(2)これら2種類の受容体は前駆体のミトコンドリア標的シグナルを特異的に認識するがその認識機構は両者で明確に異なること(3)2つの受容体間での前駆体の授受が可逆的であることを明かにした。これによって受容体による前駆体の認識機構を解析することが可能となった。【3】哺乳類ミトコンドリアの受容体としてTom30/metaxinを見いだした。

分析了将前体蛋白运输到大鼠肝线粒体的过程，并进一步分析了线粒体转运启动子MSF和前体蛋白之间的相互作用。 [1]蛋白质转移到线粒体需要在内膜的细胞质和基质和膜电位中进行ATP。通过依次去除这些能量并运输它。我们成功构建了一个系统，该系统在前体蛋白到达基质之前有效捕获了六个转运中间体，并分析了这些中间体的性质。这为生化分析外膜和内膜传输设备开辟了道路。 [2]我们已经揭示了线粒体传输所需的细胞质伴侣MSF和HSP70，但是这次我们纯化了所有三种前体蛋白：外膜受体TOM70和TOM70和TOM20，TOM20和TOM20，HSP70和MSF的细胞质区域，并将其用于分析这些对求解的相互作用。结果，我们揭示了（1）MSF是将前体与TOM70结合所必需的，无论其类型如何，HSP70是将前体与TOM20（2）结合Tom20（2）这两种受体的结合所必需的，这些受体特异性地识别了前体的线粒体靶标信号，但是它们之间的识别机制在两个受体之间显然是在两种受体之间的转移和（3）。这使得可以通过受体分析识别前体的识别机理。 [3] TOM30/Metaxin被发现是哺乳动物线粒体的受体。