HCV VectorによるHCV感染過程の制御分子の同定

使用HCV载体鉴定调节HCV感染过程的分子

基本信息

批准号：
14657129
负责人：
榎本信幸
金额：
$ 2.18万
依托单位：
Tokyo Medical and Dental University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究は、新たなHCV増殖系であるHCV replicon系を応用して、細胞内でのHCV-RNA遺伝子複製過程を制御する分子群を同定することを目的として行われ、今年度次の成果を得た。1.HC-J4株から独自に構築したレプリコンにおいて、NS5A領域の特定のアミノ酸変異を有するクローンが高レベルのゲノム増殖を生じることを明かにした(J Viral Hepatitis 2004 in press)。2.キメラ・リポーター発現レプリコンを用いたウイルス増殖定量システムを構築し、インターフェロン、リバビリン等の薬剤を用いたウイルス増殖抑制効果の定量的解析の結果を報告した(J Infect Dis2004 in press)。3.宿主遺伝子を特異的に破壊するsmall interfering RNA(siRNA)の効果を解析するためHCVゲノムを標的とするsiRNAを構築し、レプリコン発現細胞に導入したところ、強い遺伝子破壊効果(最大96%)が認められた。さらに、細胞内でヘアピン型siRNAを発現するDNAプラスミドベクターを構築し抑制効果を確認した。4.インターフェロン誘導遺伝子の発現を制御するinterferon regulatory factor(IRF)1及びIRF-3を遺伝子導入することにより、レプリコン増殖が著明に抑制された。またIRF-3をsiRNAにより抑制したところHCV増殖が上昇し、細胞内においてIRFの機能がウイルス持続感染増殖に密接に関与することを見いだした(論文投稿中)。本研究により同定される分子群はいずれもHCV研究あるいは治療開発の新しい分野への展開が期待できるものであり、今後さらにウイルス増殖に関与する宿主蛋白の同定、抗ウイルス療法の新たな標的分子の探索を遂行して行く。

本研究的目的是通过应用HCV复制子系统（一种新的HCV传播系统）来识别一组控制细胞内HCV-RNA基因复制过程的分子。 1. 在最初由 HC-J4 菌株构建的复制子中，我们发现 NS5A 区域具有特定氨基酸突变的克隆导致高水平的基因组增殖（J Viral Hepatitis 2004 年出版）。 2.我们利用表达嵌合报告基因的复制子构建了病毒生长定量系统，并报道了使用干扰素和利巴韦林等药物对病毒生长抑制效果进行定量分析的结果（J Infect Dis2004，出版中）。 3.为了分析特异性破坏宿主基因的小干扰RNA（siRNA）的效果，我们构建了针对HCV基因组的siRNA，并将其导入复制子表达细胞中，表现出强大的基因破坏效果（高达96%）被认可了。此外，我们构建了在细胞中表达发夹型siRNA的DNA质粒载体，并证实了其抑制作用。 4.通过引入干扰素调节因子(IRF)1和IRF-3的基因来显着抑制复制子增殖，这两个因子控制干扰素诱导的基因的表达。此外，当IRF-3被siRNA抑制时，HCV增殖增加，表明IRF的功能与细胞内持续病毒感染的增殖密切相关（论文目前正在提交）。这项研究中确定的所有分子组都有望用于HCV研究和治疗开发的新领域，我们希望进一步鉴定参与病毒复制的宿主蛋白，并为抗病毒治疗开发新的靶分子进行探索。