HCV複製増殖に関わる分子シャペロン・サイクロフィリンの機能解析

参与 HCV 复制和增殖的分子伴侣亲环蛋白的功能分析

基本信息

批准号：
18790446
负责人：
中川美奈
金额：
$ 2.24万
依托单位：
Tokyo Medical and Dental University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

免疫抑制剤であるサイクロスポリンA (CsA)は濃度依存性にC型肝炎ウイルス(HCV)レプリコン増殖を抑制し、その50%抑制濃度は臨床血中濃度域である0.5μg/mlであるが、CsAではインターフェロンでみられるような細胞内ISRE活性の上昇は認められず、そのHCV増殖抑制効果はインターフェロンとは独立した作用機構を介すると考えられた。CsAの細胞内受容体であるサイクロフィリンはこれまでもHIV Gag蛋白と結合し、その感染、増殖との関連性が報告されており、HCVの複製増殖にどれほど関与しているかを確認することは重要であり以下検討をすすめた。細胞質、及び小胞体(ER)に局在するサイクロフィリンA、B及びCに対するsiRNA発現ベクターによりノックダウン細胞を作成し、レプリコンの増殖効果を解析したところ、それぞれのサイクロフィリンの発現抑制によりレプリコン増殖は有意な抑制効果を認め、これらのサイクロフィリンがHCV増殖に関与していると考えられた。免疫抑制能の弱いサイクロスポリンDも同様のHCVレプリコン増殖抑制効果がみられ、サイクロスポリンの抗ウイルス効果はサイクロフィリンの活性阻害を介することが確認された。Two hybrid法では、HCV蛋白とサイクロフィリンA, BおよびCの直接会合は認めなかったため、ヒト肝臓cDNAライブラリーを用いて宿主蛋白の網羅的スクリーニングを行ったところ、サイクロフィリンと会合する蛋白がいくつか同定された。今回同定された蛋白のsiRNAによる発現抑制ではウイルス増殖は80%程度の抑制にとどまった。HCV蛋白とサイクロフィリンの直接相互作用は認められず、第3の分子の関与が推定されたが、サイクロフィリンと相互作用する宿主蛋白を同定することは、新たな抗ウイルス分子標的の同定・新規治療開発につながると考えられ現在研究を遂行中である。

环孢素A（CsA）是一种免疫抑制剂，以浓度依赖性方式抑制丙型肝炎病毒（HCV）复制子增殖，其50%抑制浓度为0.5μg/ml，在临床血药浓度范围内。没有显示干扰素所见的细胞内 ISRE 活性增加，表明其 HCV 生长抑制作用是由独立于干扰素的作用机制介导的。亲环素是 CsA 的细胞内受体，据报道与 HIV Gag 蛋白结合并与其感染和增殖相关，但很难确认它在多大程度上参与 HCV 复制和增殖，这一点很重要，我们对此进行了研究。建议考虑以下事项。我们使用位于细胞质和内质网（ER）的亲环蛋白A、B和C的siRNA表达载体创建了敲低细胞，并分析了复制子的增殖效应，显示出显着的抑制作用，表明这些亲环蛋白参与其中。在HCV增殖中。具有弱免疫抑制能力的环孢菌素D也具有类似的抑制HCV复制子生长的作用，证实环孢菌素的抗病毒作用是通过抑制亲环蛋白活性来介导的。在两种混合方法中，没有观察到 HCV 蛋白与亲环蛋白 A、B 和 C 之间的直接关联，因此使用人肝脏 cDNA 文库对宿主蛋白进行全面筛选，揭示了有多少与亲环蛋白相关的蛋白。这次使用siRNA抑制蛋白质的表达仅抑制了病毒增殖约80%。虽然没有观察到 HCV 蛋白和亲环蛋白之间的直接相互作用，并且推测有第三种分子参与，但鉴定与亲环蛋白相互作用的宿主蛋白是鉴定新的抗病毒分子靶点和新靶点的重要方法，因为它目前正在进行。被认为会导致治疗的发展。