HCV複製増殖に関わる分子シャペロン・サイクロフィリンの機能解析

参与 HCV 复制和增殖的分子伴侣亲环蛋白的功能分析

基本信息

批准号：
18790446
负责人：
中川美奈
金额：
$ 2.24万
依托单位：
Tokyo Medical and Dental University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

免疫抑制剤であるサイクロスポリンA (CsA)は濃度依存性にC型肝炎ウイルス(HCV)レプリコン増殖を抑制し、その50%抑制濃度は臨床血中濃度域である0.5μg/mlであるが、CsAではインターフェロンでみられるような細胞内ISRE活性の上昇は認められず、そのHCV増殖抑制効果はインターフェロンとは独立した作用機構を介すると考えられた。CsAの細胞内受容体であるサイクロフィリンはこれまでもHIV Gag蛋白と結合し、その感染、増殖との関連性が報告されており、HCVの複製増殖にどれほど関与しているかを確認することは重要であり以下検討をすすめた。細胞質、及び小胞体(ER)に局在するサイクロフィリンA、B及びCに対するsiRNA発現ベクターによりノックダウン細胞を作成し、レプリコンの増殖効果を解析したところ、それぞれのサイクロフィリンの発現抑制によりレプリコン増殖は有意な抑制効果を認め、これらのサイクロフィリンがHCV増殖に関与していると考えられた。免疫抑制能の弱いサイクロスポリンDも同様のHCVレプリコン増殖抑制効果がみられ、サイクロスポリンの抗ウイルス効果はサイクロフィリンの活性阻害を介することが確認された。Two hybrid法では、HCV蛋白とサイクロフィリンA, BおよびCの直接会合は認めなかったため、ヒト肝臓cDNAライブラリーを用いて宿主蛋白の網羅的スクリーニングを行ったところ、サイクロフィリンと会合する蛋白がいくつか同定された。今回同定された蛋白のsiRNAによる発現抑制ではウイルス増殖は80%程度の抑制にとどまった。HCV蛋白とサイクロフィリンの直接相互作用は認められず、第3の分子の関与が推定されたが、サイクロフィリンと相互作用する宿主蛋白を同定することは、新たな抗ウイルス分子標的の同定・新規治療開発につながると考えられ現在研究を遂行中である。

Cyclosporin A (CsA), an immunosuppressant, inhibits the proliferation of hepatitis C virus (HCV) replicons in a concentration-dependent manner, with a 50% inhibitory concentration of 0.5 μg/ml, which is the clinical blood concentration range, but CsA does not show an increase in intracellular ISRE activity as seen with interferons, and its HCV proliferation inhibitory effect被认为是通过独立于干扰素的作用机制。周期素是一种CSA的细胞内受体，以前已报道与HIV GAG蛋白结合及其与感染和增殖的关联，并且重要的是确认其与HCV的复制和增殖有关，我们建议您考虑以下考虑。使用siRNA表达载体的环蛋白A，B和C产生敲低细胞，该矢量位于细胞质和内质网（ER）中，并分析了复制子的增殖效应。复制子增殖具有明显的抑制作用，这是由于每种环蛋白的表达抑制作用，因此人们认为这些环胞素参与了HCV增殖。环孢菌素D的免疫抑制能力弱，也表现出抑制HCV复制子生长的相似作用，并且可以证实，环磷脂的抗病毒作用是通过抑制环磷脂活性而介导的。在两种杂化方法中，观察到HCV蛋白与环金蛋白A，B和C的直接关联，并使用人肝脏cDNA文库对宿主蛋白进行了全面的筛查，并确定了几种与环磷脂相关的蛋白。当这项研究中鉴定的蛋白质被siRNA抑制时，病毒增殖限制为约80％。未观察到HCV蛋白与环磷脂之间的直接相互作用，并且假定第三分子的参与，但是与环磷脂相互作用的宿主蛋白的鉴定将导致鉴定新的抗病毒分子靶标和新处理的发展，并且目前正在进行研究。