Suppression subtraction法による消化器疾患の分子病態解析

抑制减法法对胃肠道疾病的分子病理学分析

基本信息

批准号：
13204027
负责人：
榎本信幸
金额：
$ 4.16万
依托单位：
Tokyo Medical and Dental University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13204027/
关键词：
消化器疾患遺伝子発現 subtraction

项目摘要

(1)生検材料から得られる微量のtotal RNAよりmRNAを特異的にlong distance PCRにより増幅するSMART PCR法を導入し、lugのtotal RNAから数十microgramのmRNA由来のcDNAを得ることが可能となった。さらに、suppressive subtraction法による高効率のsubtraction cloningを行い、疾患特異的発現をする遺伝子のPCR産物を得ることができた。(2)肝癌cDNAと周囲非癌部cDNAをsubtractionすることにより、FAK, GS, DCC, Gia, PGC, decorinなどの遺伝子の肝癌における特異的な発現変化を見いだした。(3)大腸癌から周辺正常大腸粘膜のsubtractionでは、同様にCEA, NCA, Bub1, Maspin, T0G, GABA-R, dkk4などの遺伝子の発現を確認した。(4)慢性C型肝炎および自己免疫性肝炎ではchemokineであるIP-10が特異的に発現していた。(5)原発性胆汁性肝硬変では種々のミトコンドリア由来遺伝子が発現していることを見いだした。最近、消化器疾患においても遺伝子発現変化の解析にmicroarrayが導入されているが、個々の解析結果は多様であり、これらの疾患の病態の全体像を解明しうる普遍的な結果は未だ得られていないと思われる。本研究で同定された遺伝子変化もこれらのmicroarrayでの結果とは異なるものもあり、当面、これらの解析手法は相互に補完的な情報をもたらすと考えられる。一方、本研究で慢性肝炎で発現が上昇していることが明らかとIP-10は急性C型肝炎動物モデルのmicroarray解析でも最も発現変化の大きな遺伝子の一つであり、病態の解明に重要な分子と考えらる。

(1)通过引入使用长距离PCR从活检材料中获得的微量总RNA特异性扩增mRNA的SMART PCR方法，可以从1g总RNA中获得数十微克的源自mRNA的cDNA。此外，我们利用抑制性消减方法进行了高效的消减克隆，并能够获得具有疾病特异性表达的基因的PCR产物。 (2)通过将肝癌cDNA与周围非癌cDNA相减，我们发现肝癌中FAK、GS、DCC、Gia、PGC、核心蛋白聚糖等基因的特异性表达变化。 (3)在从结肠癌中减去周围正常结肠粘膜时，我们同样确认了CEA、NCA、Bub1、Maspin、T0G、GABA-R和dkk4等基因的表达。 (4)IP-10是一种趋化因子，在慢性丙型肝炎和自身免疫性肝炎中特异性表达。 (5)我们发现多种线粒体衍生基因在原发性胆汁性肝硬化中表达。最近，已经引入微阵列来分析胃肠道疾病的基因表达变化，但个体分析结果各不相同，并且尚未获得能够阐明这些疾病的整体病理学的通用结果。本研究中确定的一些遗传变化与使用这些微阵列获得的结果不同，目前，这些分析方法有望提供补充信息。另一方面，本研究明确IP-10在慢性肝炎中表达增加，并且IP-10是急性丙型肝炎动物模型微阵列分析中表达变化最大的基因之一，并且IP-10是急性丙型肝炎动物模型中表达变化最大的基因之一。它对于阐明发病机制很重要。它可以被认为是一个分子。