C型肝炎ウイルスNS5A蛋白によるHCV増殖制御機構の解明

阐明丙型肝炎病毒NS5A蛋白控制HCV生长的机制

基本信息

批准号：
16017237
负责人：
榎本信幸
金额：
$ 6.14万
依托单位：
University of Yamanashi
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16017237/
关键词：
C型肝炎レプリコンインターフェロン IRF ISDR

项目摘要

(1)HCV増殖制御分子群の同定我々はHCV replicon増殖細胞、repliconをIFNで除去(cure)したcured-Huh7細胞、naiveなHuh7細胞を用いた検討から、HCV-replicon増殖にはIFN誘導遺伝子群(ISG)の発現低下が必要であることを示してきた。これまでの検討により、ISGの中でもHCV増殖との関連が強く示唆された23蛋白に絞り込み、それぞれ強制発現とノックダウンを行い、増殖制御にcriticalな分子を探索した。その結果、現在までに報告されていないGBP-1,IFI-6-16,IFI-27の3分子が、強力な抗HCV効果を示す分子であることを明らかにした。(2)NS5A-ISDR配列によるreplicon増殖制御の解明NS5A-ISDRにおけるアミノ酸変異がHCV replicon増殖に与える影響を、同領域に系統的な変異を導入することにより解析した。(1)臨床検体から得られた、ISDRにおける様々なパターンの多数変異(>4)配列をrepliconに導入した。(2)アミノ酸変異数のみでなく、変異部位が増殖に与える影響を検討するため、臨床的な解析からIFN感受性との関連性が示唆された複数の特定部位における1アミノ酸変異を導入した。多数変異をもつrepliconすべて、また1アミノ酸変異を導入した群においては、特にIFN感受性との強い関連が示唆されているアミノ酸番号A2209の変異をrepliconに導入したとき増殖は著しく亢進し、HCV replicon増殖が臨床的なIFN感受性配列依存的に規定されていることが示された。3)HCV増殖制御因子サイクロフィリンの同定我々は昨年、免疫抑制剤であるサイクロスポリンAが、HCV repliconの細胞内増殖を特異的に抑制することを明らかにした。しかしながら同薬の抗HCV機序については不明であった。今回我々は、サイクロスポリンAの抗HCV機序が、PPIase(peptidyl prolyl cis-trans イソメラーゼ)活性を持つサイクロフィリンの抑制を通じたものであることを明らかにした。我々はさらに免疫抑制阻害活性を持たず、PPIase阻害活性のみ有するサイクロスポリンDの、抗HCV薬としての可能性も示した。

(1)调节HCV增殖的分子的鉴定我们已经表明有必要减少ISG的表达。基于我们之前的研究，我们将研究范围缩小到 23 种 ISG 蛋白，这些蛋白被强烈认为与 HCV 增殖、每种蛋白的强制表达和敲低相关，并寻找对生长控制至关重要的分子。结果表明，迄今为止尚未报道的三种分子GBP-1、IFI-6-16和IFI-27表现出很强的抗HCV作用。 (2)阐明NS5A-ISDR序列对复制子增殖的调节通过在同一区域引入系统突变，分析NS5A-ISDR中的氨基酸突变对HCV复制子增殖的影响。 (1)将从临床标本获得的ISDR中各种模式的多突变(>4)序列引入复制子中。 (2)为了检验氨基酸突变数量和突变位点对增殖的影响，我们在多个特定位点引入了单个氨基酸突变，通过临床分析，这些突变被认为与IFN敏感性相关。在所有具有多个突变的复制子和引入单个氨基酸突变的组中，当将被认为与IFN敏感性有很强关系的氨基酸编号A2209的突变引入到复制子中时，增殖被抑制。显着增强，HCV 复制子增殖显着增加，以临床 IFN 敏感序列依赖性方式定义。 3）HCV生长调节剂亲环蛋白的鉴定去年，我们发现免疫抑制剂环孢菌素A特异性抑制HCV复制子的细胞内生长。然而，该药物的抗HCV机制尚不清楚。在这里，我们揭示了环孢菌素A的抗HCV机制是通过抑制具有PPIase（肽基脯氨酰顺反异构酶）活性的亲环蛋白。我们还证明了环孢菌素 D 作为抗 HCV 药物的潜力，它不具有免疫抑制抑制活性，而仅具有 PPIase 抑制活性。