小胞体ストレスで誘導される分子シャペロンを標的としたC型肝炎治療の開発

开发针对内质网应激诱导的分子伴侣的丙型肝炎治疗方法

基本信息

批准号：
16659185
负责人：
榎本信幸
金额：
$ 2.05万
依托单位：
University of Yamanashi
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

サイクロスポリンAのHCV増殖抑制が、分子シャペロンであるサイクロフィリンの活性阻害によることを証明するために、特異的遺伝子発現抑制法であるsiRNAを用いてサイクロスポリンAの標的宿主遺伝子であるサイクロフィリン遺伝子発現の抑制を行いHCV増殖への影響を解析した。その結果、小胞体蛋白の分子シャペロンであるサイクロフィリンBのsiRNAによるノックダウンがHCV増殖を抑制することを確認し、Gastroenteologys誌に論文として発表した。種々のERストレスを惹起する薬剤、すなわち蛋白の糖鎖付加を阻害するツニカマイシン、小胞体内カルシウム濃度を低下させるタプシガルギンなどのHCV増殖に与える影響を解析し、ERストレスの中でも小胞体からのカルシウムの枯渇がHCV増殖を抑制することを見出した。また小胞体内に蓄積しERストレスを惹起すると考えらるHCV構造蛋白を発現し、これまでのHCV非構造蛋白のみを発現するHCVレプリコンよりも生体内のHCV増殖をより忠実に再現するHCV全長レプリコンとして、JFH株による培養細胞増殖系の導入を行った。今後、これによりERストレスとHCV増殖の関連を検討する予定である。ATF6はERストレスすなわち小胞体での異常蛋白の蓄積に反応して、小胞体より核に移行しERストレス反応遺伝子群の発現を誘導するERストレス制御の最も上流に位置する転写因子であり、実際にサイクロスポリンによりHCV増殖細胞内で発現が亢進することを見出した。今後、ATF6により誘導されるERストレス反応遺伝子群のなかの如何なる遺伝子がHCV増殖において本質的役割をになっているかを明らかとするため、DNAマイクロアレイを用いた網羅的解析により、HCV増殖下で活性化される遺伝子のなかで、ATF6反応性遺伝子を同定する予定である。

为了证明环孢素A抑制HCV生长是由于抑制了分子伴侣亲环蛋白的活性，我们采用特异性基因表达抑制方法siRNA来抑制靶宿主环孢素A的生长。环孢菌素A基因。我们抑制filin基因表达并分析其对HCV增殖的影响。结果，他们证实通过 siRNA 敲低亲环蛋白 B（内质网蛋白的分子伴侣）可抑制 HCV 增殖，并将这一发现发表在《Gastroenteology》杂志上。我们分析了各种诱导 ER 应激的药物对 HCV 增殖的影响，例如抑制蛋白质糖基化的衣霉素和降低内质网钙浓度的毒胡萝卜素，我们发现耗尽会抑制 HCV 增殖。它还表达被认为在内质网中积累并诱导内质网应激的HCV结构蛋白，并且是一种全长HCV，比仅表达HCV非结构蛋白的传统HCV复制子更忠实地再现体内HCV增殖。引入了复制子，这是一种使用 JFH 菌株的培养细胞生长系统。未来，我们计划用这种方法来研究ER应激与HCV增殖之间的关系。 ATF6是位于内质网应激调节最上游水平的转录因子，从内质网转位至细胞核，诱导内质网应激反应基因表达，以应对内质网应激，即异常蛋白在细胞内的积累。我们发现环孢菌素增强了 HCV 增殖细胞的表达。今后，为了明确ATF6诱导的ER应激反应基因组中哪些基因在HCV增殖中发挥重要作用，我们将利用DNA微阵列进行全面分析，以明确哪些基因在HCV增殖下发挥着重要作用。为了进行分析，我们计划鉴定 ATF6 反应基因。