C型肝炎ウイルスRNAの細胞内複製:遺伝子型2b由来ミニ遺伝子の作製と解析

丙型肝炎病毒RNA的细胞内复制：源自基因型2b的小基因的制备和分析

基本信息

批准号：
11770155
负责人：
鴨下信彦
金额：
$ 1.47万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至 2000
项目状态：
已结题

项目摘要

1.C型肝炎ウイルス(HCV)のRNAの5′と3′両側には、ウイルスに固有の塩基配列が存在し、ウイルス複製に重要な役割を果たしている。翻訳開始のシスエレメントである5′側の配列IRES(internal ribosomal entry site)が、3′非翻訳領域内の塩基配列により受ける影響を検討した。その結果、ポリU/CトラクトがRNAの安定性とは無関係にIRES依存性の翻訳開始を抑制することを証明した。スプライシング因子であるポリピリミジントラクト結合蛋白(PTB)は、HCVの3′非翻訳領域に結合することが知られていたが、翻訳領域内の塩基配列にも結合し、IRES活性を抑制することを報告した(Arch.Virol.印刷中)。2.バキュロウイルスベクターを用いたCre-loxPシステムにより、培養細胞でHCV蛋白の発現を、長時間にわたり高頻度に誘導することに成功した。長期にわたるレプリコン活性の測定に有利な系を確立できたと考えられる。3.感染個体内にはQuasipeciesが存在することから、クローニングした遺伝子にレプリコン活性がない可能性も考えられた。海外のグループが報告したジシストロニックレプリコンを、申請者らが樹立したクローンで作製した。昨年度確立したプラス鎖特異的RT-PCRを用いて、レプリコン活性を培養細胞内で観察することに成功した。

1、丙型肝炎病毒（HCV）RNA的5'和3'两侧均存在病毒特异性核苷酸序列，在病毒复制中发挥重要作用。我们研究了 3' 非翻译区内的核苷酸序列对 5' 序列 IRES（内部核糖体进入位点）的影响，IRES 是翻译起始的顺式元件。结果表明，polyU/C 束抑制 IRES 依赖性翻译起始，与 RNA 稳定性无关。多嘧啶束结合蛋白 (PTB) 是一种剪接因子，已知可与 HCV 的 3' 非翻译区结合，但它也已被证明可与翻译区内的碱基序列结合并抑制 IRES 活性（Arch. Virol。正在出版）。 2. 使用杆状病毒载体的Cre-loxP系统，我们成功地在培养细胞中长时间、高频率地诱导HCV蛋白表达。我们相信我们已经建立了一个有利于长期测量复制子活动的系统。 3. 由于受感染个体中存在准种，因此克隆的基因可能不具有复制子活性。海外研究小组报告的双顺反子复制子是利用申请人建立的克隆创建的。利用去年建立的正链特异性RT-PCR，我们成功地观察了培养细胞中的复制子活性。