ウイルス複製における宿主因子PI4KB/OSBP機能の解明

阐明宿主因子 PI4KB/OSBP 在病毒复制中的功能

基本信息

批准号：
22K07107
负责人：
有田峰太郎
金额：
$ 2.66万
依托单位：
National Institute of Infectious Diseases
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K07107/
关键词：
エンテロウイルス宿主因子 PI4KB OSBP 阻害剤依存性

项目摘要

OSBPのリガンド結合ドメインの構造を決定し、これまでに同定していたOSBP阻害剤T-00127-HEV2の結合に影響しうるアミノ酸残基置換（L590W, M446W）を同定した。L590W置換は、リガンド結合ドメインの発現レベルを上昇させることで、T-00127-HEV2およびその他のOSBP阻害剤に対して見かけ上の耐性を与えることが明らかになった。一方、M446W置換は、T-00127-HEV2のリガンド結合ドメインへの結合を阻害することが明らかにされた。M446W置換はT-00127-HEV2に特異的な耐性を与えたことから、M446WのT-00127-HEV2への相互作用はこの阻害剤に特異的なものであることが示唆された。このことを利用して、M446W置換を持ったOSBP変異体を高発現させることで、ウイルス複製を促進するために必要なOSBPドメインを同定することができる測定系を作成した。この系を用いて解析したところ、OSBPの脂質輸送活性に必要であるPHドメインとリガンド結合ドメインについてはウイルス複製の促進に必要であることが示された。一方、OSBPを小胞体に引き止めるためのVAPA/VAPBへの結合に必要なFFATモチーフや２量体化に必要な領域はウイルス複製を促進するためには必要でないことが明らかにされた。これらの結果から、ウイルス複製においては、OSBPはVAPA/VAPBを介して小胞体に結合することは必要ではなく、ウイルス側の因子やそれに伴うPI4Pの産生がOSBPのウイルス複製膜への局在および活性に必要とされることが示唆された。

我们确定了 OSBP 配体结合域的结构，并鉴定了可能影响先前鉴定的 OSBP 抑制剂 T-00127-HEV2 结合的氨基酸残基取代（L590W、M446W）。发现 L590W 取代通过增加配体结合域的表达水平而赋予对 T-00127-HEV2 和其他 OSBP 抑制剂的明显抗性。另一方面，M446W 取代被发现会抑制与 T-00127-HEV2 配体结合结构域的结合。 M446W 取代赋予了对 T-00127-HEV2 的特异性抗性，表明 M446W 与 T-00127-HEV2 的相互作用对该抑制剂具有特异性。利用这一点，我们创建了一个测量系统，可以通过高度表达具有 M446W 取代的 OSBP 突变体来识别促进病毒复制所需的 OSBP 结构域。使用该系统的分析表明，脂质转运活性所需的OSBP的PH结构域和配体结合结构域对于促进病毒复制是必需的。另一方面，揭示了与VAPA/VAPB结合以将OSBP保留在内质网中所需的FFAT基序和二聚化所需的区域不是促进病毒复制所必需的。这些结果表明，在病毒复制过程中，OSBP 不一定通过 VAPA/VAPB 与内质网结合，并且病毒因子和相关的 PI4P 产生负责 OSBP 定位到病毒复制膜。它是活动所必需的。