腎糸球体基底膜におけるマトリックス分子構築と遺伝子発現

肾小球基底膜基质分子构建及基因表达

基本信息

批准号：
07671251
负责人：
大橋俊孝
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Okayama University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07671251/
关键词：
基底膜 IV型コラーゲンノックアウトマウス

项目摘要

1.マウスα6(IV)鎖遺伝子(col4a6)及びα5(IV)鎖遺伝子(col4a5)上流プロモーター領域遺伝子断片のクローニングマウスα6(IV)鎖及びα5(IV)鎖cDNAをプローブとして129SVJマウスのゲノムDNAライブラリーをスクリーニングし、両遺伝子上流プロモーター領域を含むクローンTSg6を分離した。2.col4a6及びcol4a5遺伝子発現調節機構の解析上記クローンTSg6を解析したところ、col4a5のエキソン1とcol4a6のエキソン1,2が含まれてした。しかしながら、ヒトでみられた第一エキソンの択一的スプライシングはマウスα6(IV)鎖遺伝子ではみられなかった。現在、col4a6上流DNA断片をCAT遺伝子及びLacZ遺伝子に連結したconstructを作製し遺伝子発現調節機構解析を行なっているところである。3.col4a6遺伝子のノックアウトマウスの作製第1項で得られたcol4a6断片を利用して、col4a6のエキソン2部分にNeo^r遺伝子を挿入し、null mutationの改変を導入するターゲティングconstructを作成した。ES細胞ヘターゲティングconstruct DNAの注入後、サザンブロティングにより相補的遺伝子組換えの起こっているES細胞クローンを選別し、胚盤胞へ注入した。現在、キメラマウスの誕生を待っている段階である。4.Alport症候群,(平滑筋腫との合併症),Goodpasture症候群の病因と各α(IV)鎖との関連を調べる。ヒトα6(IV)鎖遺伝子の構造解析プロジェクトから決定されたエクソン・イントロン構造を基に、平滑筋腫との合併を伴ったAlport症候群患者の白血球DNAを用いて、α6(IV)鎖遺伝子及びα5(IV)鎖遺伝子の欠失領域の解析を行なっている。両遺伝子のイントロン1にまたがって欠失した症例が発見できた。さらに、細かい欠失部分解析を行なっている。これらの遺伝子解析によりこの症例の病因解析が進展すると期待される。

1.以小鼠α6(IV)链和α5(IV)链cDNA为探针，克隆小鼠α6(IV)链基因(col4a6)和α5(IV)链基因(col4a5)上游启动子区基因片段129SVJ小鼠基因组DNA。筛选文库并分离出含有两个基因上游启动子区域的克隆TSg6。 2、col4a6和col4a5基因表达调控机制分析当我们对上述克隆TSg6进行分析时，发现其含有col4a5的外显子1和col4a6的外显子1和2。然而，在人类中观察到的第一个外显子的选择性剪接在小鼠 α6(IV) 链基因中并未观察到。我们目前正在构建将col4a6上游DNA片段与CAT基因和LacZ基因连接的构建体，并正在分析基因表达调控机制。 3.创建col4a6基因敲除小鼠使用第1节中获得的col4a6片段，创建靶向构建体，将Neo^r基因插入到col4a6的外显子2中并引入无效突变。注射靶向ES细胞的构建体DNA后，通过Southern印迹选择具有互补基因重组的ES细胞克隆并注射到囊胚中。目前，我们正在等待嵌合小鼠的诞生。 4. 研究 Alport 综合征（平滑肌瘤并发症）和 Goodpasture 综合征的病因与各 α(IV) 链之间的关系。基于人类α6(IV)链基因结构分析项目确定的外显子-内含子结构，我们分析了α6(IV)链基因和α5(我们目前正在分析IV)链基因的缺失区域。发现了一个案例，其中的缺失跨越了两个基因的内含子 1。此外，我们正在进行详细的删除分析。预计这些遗传分析将推进该病例的发病机制。