テトラヒドロビオプテリン受容体のクローニング及びその機能解析

四氢生物蝶呤受体的克隆及其功能分析

基本信息

批准号：
05670087
负责人：
三輪聡一
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1.〔3H〕ドーパミンでラベルしたラット脳線条体のスライス標本からのドーパミン遊離に対する天然型(6R型)テトラヒドロビオプテリン(6R-BH4)の影響を検討し,6R-BH4が脱分極刺激により誘発されるドーパミン遊離を増加させることを見いだした。2.天然型(6R型)テトロヒドロビオプテリン(6R-BH4)の〔3H〕標識体を新たに作製し,これを用いてラット全脳から調整した膜分画に対する結合実験を行った。その結果,脳の膜分画には6R-BH4の特異的結合部位が存在することを明らかになった。その結合部位の解離定数(Kd)は21nMであり,最大結合数(Bmax)は550fmol/mg proteinであった。一方、6S-BH4のKdは,6R-BH4のKdに比べて約千倍高かった。3.Fura 2を負荷した培養神経細胞であるPC12細胞において,6R-BH4の細胞内遊離カルシウム濃度に対する影響を検討し,6R-BH4が細胞内遊離カルシウム濃度の増加をきたすことを明らかにした。4.延髄の迷走神経背側核の神経細胞にパッチクランプ法を適用し,6R-BH4のチャンネル活性に対する影響を検討した。その結果,6R-BH4が神経細胞の発火頻度の増加をきたすこと,また,内向き電流を誘発することが明らかになった。さらに,カルシウムチャンネル電流に対する影響を検討し,6R-BH4がN型カルシウムチャンネル電流を特異的に増強することを明らかにした。5.以上の結果より,6R-BH4は神経細胞膜の特異的結合部位に結合することによりN型カルシウムチャンネルを活性化し,細胞内遊離カルシウム濃度の増加をきたす結果,神経伝達物質遊離を誘発することを明らかにした。

1。我们研究了天然（6R型）四氢无菌蛋白（6R-BH4）对用[3H]多巴胺标记的大鼠脑纹状体的切片标本中多巴胺释放的影响，并发现6R-BH4增加了受到极化刺激诱导的多巴胺释放。 2。新制备的天然（6R型）四氢无生物蛋白（6R-BH4）的A [3H]标记，并对由全鼠大脑制备的膜分数进行结合实验。结果表明，在大脑的膜分数中存在6R-BH4的特定结合位点。结合位点的解离常数（KD）为21 nm，最大结合数（BMAX）为550 fmol/mg蛋白。另一方面，6S-BH4的KD比6R-BH4的KD高约一千倍。 3。我们研究了6R-BH4对PC12细胞中细胞内游离钙浓度的影响，PC12细胞是一种培养的神经元，载有Fura 2，并揭示了6R-BH4增加了细胞内游离钙浓度。 4。斑块夹法应用于髓质长圆形的背核中的神经元，研究了6R-BH4对通道活性的影响。结果表明，6R-BH4增加了神经元中火的频率，并且还会诱导内向电流。此外，研究了对钙通道电流的影响，并发现6R-BH4特异性增强了N型钙通道电流。 5。以上结果表明，6R-BH4通过与神经元细胞膜的特定结合位点结合来激活N型钙通道，从而在细胞内增加游离钙的浓度，并诱导神经递质释放。