耳管粘膜下における脂肪細胞の分化誘導-耳管開放症の根本的治療法の開発-

诱导咽鼓管粘膜下脂肪细胞的分化 -开发开放性咽鼓管疾病的根本治疗方法 -

• 批准号: 16659459
• 负责人: 小林 俊光
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16659459/
• 关键词: 耳管開放症; 脂肪細胞; オストマン脂肪体; 耳管; 間葉系幹細胞; 再生医療

耳管開放症には様々な要因がある。以前からオストマン脂肪体の萎縮などが指摘されているが、我々の行った耳管MRI検査では、必ずしも、脂肪の萎縮のみでは説明困難な例も多く、むしろ、口蓋帆挙筋や口蓋帆張筋、内側翼突筋、外側翼突筋、耳管軟骨など脂肪体も含めた耳管周囲支持組織の脆弱化が示唆される。そのため、近年、再生医療として、ES細胞や幹細胞を利用した研究、臨床応用が注目を浴びているが、単に脂肪細胞に分化する幹細胞を用いるのではなく、筋組織にも分化しうる細胞を耳管粘膜下に移植することを目標としている。今回我々は、東北大学加齢医学研究所の協力の下、cell line化したマウス骨髄由来間葉系幹細胞(TBR31-2)を用いて耳管内粘膜下移植を試みた。in vitroでは、confluent後7日〜10日で脂肪細胞や平滑筋に分化を始め、21日後には脂肪や平滑筋の細胞集団を形成するようになった、条件を変えることで、骨格筋、骨、心筋、血管内皮細胞にも分化することが各々に特異的な染色を行うことで確認できた。また、サイトカイン(BMP2、BMP4など)を加えることにより、目標とする細胞集団への分化や細胞成長速度をよりコントロールすることも確認できた。in vitroでは、マウス皮下に局所注入移植を行い、免疫染色により、脂肪、平滑筋などに分化することを確認した。しかし、マウス耳管への移植で成功例はない。マウス耳管へのアプローチが困難であること、移植できたものの生着観察期間生存できなかったことが一因である。マウス耳管へのアプローチ法の改善や、免疫抑制剤を併用したモルモット耳管への移植を今後試みる。

造成咽鼓管开放的原因有多种。造口脂肪垫萎缩已被指出有一段时间了，但我们的咽鼓管MRI检查显示，有很多病例不能单独用脂肪萎缩来解释，而是牵涉到腭帆提肌和腭帆张肌。这表明咽鼓管周围的支持组织（包括脂肪垫）减弱，例如翼内肌、翼外肌和咽鼓管软骨。因此，近年来，使用ES细胞和干细胞的研究和临床应用作为再生医学备受关注，但不是简单地使用分化为脂肪细胞的干细胞，而是也能分化为肌肉组织的细胞。将其植入管的粘膜下。这次，我们与东北大学衰老与衰老研究所合作，尝试使用细胞系来源的小鼠骨髓间充质干细胞（TBR31-2）进行咽鼓管内的粘膜下移植。在体外，汇合后7至10天开始分化为脂肪细胞和平滑肌，21天后开始形成脂肪和平滑肌细胞群，通过改变条件，证实骨骼肌、骨、心肌和血管内皮细胞的分化。通过对每个细胞进行特定染色。还证实，通过添加细胞因子（BMP2、BMP4等），可以更好地控制向目标细胞群的分化和细胞生长速度。在体外，对小鼠进行皮下局部注射移植，免疫染色证实分化为脂肪、平滑肌等。但目前尚无移植至小鼠咽鼓管的成功案例。部分原因是难以接近小鼠咽鼓管，虽然移植成功，但未能在植入观察期存活。未来，我们将尝试改进小鼠咽鼓管的入路，并尝试使用免疫抑制剂将其移植到豚鼠的咽鼓管中。

项目成果

耳管閉鎖障害の臨床(耳管開放症の再生・遺伝子治療)

咽鼓管闭锁症的临床治疗（咽鼓管开放性疾病的再生与基因治疗）

• 发表时间: 2005
• 期刊: 第106回日本耳鼻咽喉科学会総会 宿題報告モノグラフ
• 作者: Yoshino O;Osuga Y;Hirota Y;Koga K;Hirata T;Harada M;Morimoto C;Yano T;Nishii O;Tsutsumi O;Taketani;小林 俊光 他
• 通讯作者: 小林 俊光 他