ジアシングリセロールキナーゼの皮膚における局在及び機能の解析

二酰甘油激酶在皮肤中的定位和功能分析

基本信息

批准号：
12770422
负责人：
川口雅一
金额：
$ 1.09万
依托单位：
Yamagata University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2001
项目状态：
已结题

项目摘要

diacylglycerol kinase(DGK)は、protein kinase C(PKC)を活性化させるdiacylglycerol(DG)の代謝酵素であり、現在のところ脳などでの組織特異的発現が明らかにされ、数種のアイソタイプが報告されているが、皮膚におけるアイソタイプの発現は全く知られていない。本研究では、皮膚におけるDGKアイソタイプの発現とその局在を明らかにした。ラットの皮膚における各アイソタイプ(DGKI,II,III,IV,V型,ADGK)の発現をNorthern blotting法により解析した結果I,IV、ADGKが発現していた。その局在をin situ hybridization法で検討すると、各アイソザイムのすべてが表皮と毛包に発視が見られた。その発現は表皮よりもむしろ毛包上皮に強い発現が見られ、毛包成長と共に発現量が増していた。さらに表皮でのDGK発現を明らかにするためラット表皮の初代培養細胞を用いて解析した。生後すぐラットの皮膚を剥離し、ディスパーゼ処理し、表皮細胞をKGM培地(低Ca培地)で単層培養した細胞群、その後DMEM+10%血清(高Ca培地)にし、重層させた細胞群の各々からNorthern blotting法により解析した結果、両者ともI,IV、ADGKが発現していたが、低Ca培地ではI型の発現が弱く高Ca培地にすると発現量が増した。IV型では逆に高Ca培地より低Ca培地で発現量が多かった。ADGKでは両者に差は見られなかった。この事は表皮細胞の基底細胞ではIV型の発現が多く、分化して有棘細胞になるとI型が多く発現することを意味する。以上からDGKのアイソタイプが表皮細胞の角化にI型、IV型が各々関与する可能性が示唆された。さらにDGK-I型、IV型は表皮細胞において、増殖や分化にかかわる転写因子などにより遺伝子発現調節されていることが示唆された。

二酰基甘油激酶（DGK）是一种激活蛋白激酶C（PKC）的二酰基甘油（DG）的代谢酶。目前，已经揭示了大脑和大脑其他部分的组织特异性表达，并且已经报道了几种同种型，但是皮肤中同型的表达尚不清楚。这项研究揭示了DGK同种型在皮肤中的表达和定位。通过Northern印迹方法分析了大鼠皮肤中每种同种型（DGKI，II，III，IV，V型，ADGK）的表达，并且表达了I，IV和ADGK。当使用原位杂交方法检查其定位时，在表皮和毛囊中可见所有同工酶。它的表达在毛囊上皮而不是表皮上更强，并且随着毛囊的增长，表达水平也会增加。此外，为了阐明表皮中的DGK表达，使用了大鼠表皮的原代培养细胞。出生后立即将大鼠的皮肤分离，用分散酶处理，并在KGM培养基（低Ca培养基）中单层培养，然后用DMEM + 10％血清（高CA培养基）进行分析，然后使用北斑点方法分析，从每个分层的细胞I，IV和ADGK较高的CA表达较高，并在较低的CA表达中且较低的含量IN较低，并且在较低的表达中，并在较低的表达中进行了分析。相反，在IV型中，低CA培养基中的表达水平高于高CA培养基中的表达水平。两者在ADGK之间没有区别。这意味着IV型在表皮细胞的基底细胞中更频繁地表达，并且在区分形成鳞状细胞时，则更多地表达了I型。以上表明DGK的同种异体型可能参与表皮细胞的角化化，I型和IV型。此外，有人建议DGK型I和IV在表皮细胞中通过涉及增殖和分化的转录因子调节。