脂質性2次メッセンジャー代謝酵素の皮膚における機能解析

皮肤脂质第二信使代谢酶的功能分析

• 批准号: 14770386
• 负责人: 川口 雅一
• 金额: $ 1.86万
• 依托单位: Yamagata University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14770386/
• 关键词: diacylglycerol kinase; 表皮細胞; 尋常性乾癬; 創傷治癒; シグナル伝達; real-time PCR; protein kinase C; 尋常性乾癖

(1)尋常性乾癬におけるDGKδ splicing variantの発現我々はこれまでの研究で、ラット皮膚においてDGKα、ζ、εの3つのアイソタイプが発現しており、表皮細胞の分化、増殖および毛包成長などにDGKが重要な役割を果たすことを示唆する結果が得られていた。近年DGKδの遺伝子がクローニングされ、そのsplicing variant(DGKδ1、DGKδ2)が報告されており、EGFやTPAによりその発現が調節されることがわかっている。今回、正常皮膚および乾癬の病変部における発現をRT-PCRで解析したところ、正常皮膚と乾癬病変部での発現パターンが異なることを見出した。現在その局在を調べるためにin situ hybridization法で解析している。(2)Real-time PCRによるDGK発現量解析これまでの研究で創傷治癒過程や尋常性乾癬病変部ではDGKの発現が亢進することを明らかにしてきた。今回はLightCycler thermal cycler system (Roche Diagnostics)を用いてDGKα、ζ、εの発現量を定量するためにprimerを設計した。さらにPCR産物の同一性を確認するために融解曲線分析を行いPCRに有用なprimerを作成した。現在各種増殖因子を添加した培養角化細胞において発現量を解析中である。(3)創傷治癒モデルにおけるDGKζの発現ラットに皮膚欠損をつくり、1,3,5,7,15日目で皮膚欠損させた部分を含む周囲を切除し創傷治癒のモデルとした。このモデルをもちいて経時的にDGKζの発現変動をin situ hybridization法で解析した。DGKζは創傷治癒過程において表皮細胞および線維芽細胞において発現が亢進することを以前報告したが、今回詳細に検討したところマクロファージにおいて強い発現が見られることを明らかにした。

（1）DGKδ剪接变体在斑块牛皮癣中的表达我们先前已经研究了DGKα，ζ和ε的三种同种型在大鼠皮肤中表达，并提出DGK在表皮细胞分化，增殖，毛囊生长中起重要作用。最近，已经克隆了DGKδ基因，其剪接变体（DGKΔ1，DGKΔ2）已报道，并且发现其表达受EGF和TPA的调节。在这项研究中，通过RT-PCR分析了病变中正常皮肤和牛皮癣的表达，发现正常皮肤和牛皮癣病变中的表达模式不同。当前，使用原位杂交方法进行分析以研究其定位。 （2）使用实时PCR进行DGK表达水平的分析表明，在伤口愈合过程和斑块牛皮癣病变中，DGK表达增加。在本文中，使用LightCycler热循环系统（Roche Diagnostics）设计了引物来量化DGKα，ζ和ε的表达水平。此外，为了确认PCR产物的身份，通过分析熔融曲线来创建有用的PCR引物。当前，正在培养的角化细胞中分析表达水平，并添加各种生长因子。 （3）在表达伤口愈合模型中表达DGKζ的大鼠中产生了皮肤缺陷，在第1、3、5、7和15天，周围区域（包括被皮肤损坏的部分）的周围区域被去除，并使用了伤口愈合模型。使用此模型，通过原位杂交分析了DGKζ的表达波动。我们先前报道说，在伤口愈合过程中，DGKζ的表达在表皮细胞和成纤维细胞中得到了增强，但是经过进一步的研究，我们现在透露在巨噬细胞中发现了强表达。