皮膚におけるTNF-α変換酵素の機能解析

皮肤TNF-α转换酶的功能分析

基本信息

批准号：
21791059
负责人：
川口雅一
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Yamagata University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2009
资助国家：
日本
起止时间：
2009 至 2010
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21791059/
关键词：
皮膚 TNF-α TACE シグナル伝達遺伝子改変マウス

项目摘要

TNFα converting enzyme(TACE)のsiRNAをもちいてケラチノサイトで各種の実験を行った。TACEのsiRNAによりTACE mRNAの発現はreal time PCRにより検討したところ、80%ほど抑制された。TACE阻害剤を用いた実験では、阻害剤はケラチノサイトの遊走阻止効果やサイトカイン刺激によるケラチノサイトからのケモカイン産生を調節している結果が得られていたがsiRNAでは同様の効果は見られなかった。数種類のsiRNAで効果を検討したが、結果は同じであった。TACE阻害剤を用いてメラノーマcell lineに対して細胞死を誘導するか検討した。メラノーマcell lineをTACE阻害剤で処理した後、TNF-αで刺激し、24から48hr後の細胞数を計測した。TACE阻害剤とTNF-αは、今回検討したcell lineに対しては影響は見られなかった。今後TNF-α以外のligandで検討する予定である。また、SCCおよびmelanomaのcell lineや、手術で切除してきた組織を用いてTACEの発現や活性を測定するために標本を集積中である。TACEの基質の多くはADAM10の基質にもなりうるため、ADAM10およびEGFRなどを併せて検討を加える予定である。TACEcDNAをGFPを含んだベクターに挿入しケラチノサイトに遺伝子導入した。今後各種の刺激によるTACEの細胞内局在の変化を検討する予定である

使用TNFα转化酶（TACE）中的siRNA在角质形成细胞上进行了各种实验。通过实时PCR检查，TACE的TACE mRNA的表达被TACE抑制了约80％。在使用TACE抑制剂的实验中，抑制剂调节角质形成细胞的迁移抑制作用和通过细胞因子刺激从角质形成细胞从角质形成细胞中产生的迁移抑制作用，但与siRNA未发现相似的作用。用几种类型的siRNA研究了效果，但结果是相同的。我们研究了是否可以使用TACE抑制剂来诱导细胞死亡针对黑色素瘤细胞系。用TACE抑制剂处理黑色素瘤细胞系后，用TNF-α刺激它们，并测量24至48小时后的细胞数量。 TACE抑制剂和TNF-α不受这次检查的细胞系的影响。我们计划在TNF-α以外的将来的配体中考虑这一点。另外，正在积累样品，以使用SCC和黑色素瘤的细胞系以及已通过手术去除的组织来测量TACE的表达和活性。由于大多数TACE底物也可以是ADAM10的底物，因此我们计划也考虑ADAM10和EGFR。将TACE cDNA插入包含GFP的载体中，并转移到角质形成细胞中。将来，我们将研究由于各种刺激而导致的TACE亚细胞定位的变化。