組織特異的遺伝子改変マウスを用いた皮膚におけるTNF-α変換酵素の機能解析

使用组织特异性转基因小鼠对皮肤中的 TNF-α 转换酶进行功能分析

• 批准号: 17790751
• 负责人: 川口 雅一
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: Yamagata University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17790751/
• 关键词: TACE; トランスジェニックマウス; TACE阻害剤; 肥満細胞; 創傷治癒

これまでTACEの皮膚における発現と局在を明らかにし、肥満細胞で強い発現が見られたため、ラット肥満細胞株であるRBL-2R3におけるTACEの機能解析を行なった。RBL-2H3はイオノマイシン刺激によりTNF-αが遊離されるが、TACE阻害剤が濃度依存性にこれを抑制した。TACE阻害剤はTNF-αmRNA発現には影響しなかった。現在、刺激によるTACEの細胞内局在の変化を見るためにTACEの抗体や、FLAGをつけたTACE cDNAを遺伝子導入し検討中である。また各種抗アレルギー剤、免疫抑制剤によりTACEの発現や活性が影響を受けるか検討している。創傷治癒過程において表皮および真皮の発現が亢進し、特に遊走しているkeratinocyteおよびfibroblastに強い発現が見られることをin situ hybridizationで見出した。Myofibroblastにも発現が見られることからTACEがFibroblastからmyofibroblastへの形質転換、細胞遊走、増殖、アポトーシスに関与するか検討中である。Keratinocyteは創傷刺激によりTACEmRNAの発現が亢進するが、様々な細胞増殖因子やサイトカイン添加による発現の変動は殆ど見られなかった。TACEは細胞周期との関連が示唆されているため、培養細胞を様々な薬剤を用いて細胞周期を同調させmRNA発現を解析中である。TACE cDNA、およびdominant negative体をケラチン14プロモーターの下流につなげたコンストラクトを用いてトランスジェニックマウスを作成し、その表現型を検討中である。

到目前为止，已经揭示了TACE在皮肤中的表达和定位，并且在肥大细胞中观察到了强表达，因此我们对大鼠肥大细胞系RBL-2R3的TACE进行了功能分析。 RBL-2H3通过离子霉素刺激释放TNF-α，但TACE抑制剂以浓度依赖性方式抑制了TNF-α。 TACE抑制剂对TNF-αmRNA表达没有影响。目前，我们目前正在使用FLAG转染TACE抗体和TACE cDNA，以查看由于刺激而导致TACE的亚细胞定位的变化。我们还正在研究各种抗过敏和免疫抑制剂是否会影响TACE的表达和活性。原位杂交，发现表皮和真皮在伤口愈合过程中的表达增加了，并且在迁移的角质形成细胞和成纤维细胞中特别观察到了强烈的表达。在肌纤维细胞中也可以看到表达，因此目前正在研究是否参与了从成纤维细胞转变为肌纤维细胞，细胞迁移，增殖和凋亡。角质形成细胞增强了伤口刺激时TACE mRNA的表达，但是由于添加了各种细胞生长因子和细胞因子，表达变化不大。由于已建议TACE与细胞周期相关，因此使用各种药物分析mRNA表达的细胞周期与培养细胞同步。转基因小鼠是通过TACE cDNA构建的，并将角蛋白14启动子下游的主体负面物体连接起来，并且正在研究其表型。