ヒト胎児皮膚における角層のセル・エンベロープ構成蛋白の発現様式の解明

人胎儿皮肤角质层细胞包膜组成蛋白表达模式的阐明

基本信息

批准号：
09770668
负责人：
秋山真志
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Kitasato Institute
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09770668/
关键词：
角皮症セル・エンベロープロリクリンインボルクリン

项目摘要

(1) 凍結固定、凍結置換法を用いたPost-embedding免疫電顕法によるcornified cell envelope構成蛋白のヒト胎児皮膚における超微形態学的局在の観察ヒト胎児皮膚を細切、凍結固定装置を用いて、液体プロパン中に急速に挿入し、凍結固定を行った。この方法によって得られた各週齢の胎児皮膚を超低温に保ったままアセトン置換(凍結置換)、Lowicryl K11Mに包埋、紫外線重合させ免疫電顕用ブロックを作成した。それらより,超薄切片を作成し、抗ヒトloricrin、small proline-rich proteins、involucrin抗体、金コロイド標識2次抗体と反応させたのち、それぞれのcornified cell envelopeの前駆蛋白の超微形態学的局在部位を電顕的に観察した。(2) 観察結果の総合的評価ヒト胎児皮膚におけるcornified cell envelope構成蛋白についての、免疫組織化学法、蛍光抗体法、および、Post-embedding免疫電顕法による局在部位の観察結果とcornifed cell envelopeの形成過程の超微形態学的所見の観察の結果を総合し、cornified cell envelope構成蛋白がヒトの発生過程において、いつ、どこに、どのように発現してくるかを厳密に明らかにし,ヒト胎児皮膚におけるcornified cell envelopeの形成部位,および,形成過程を各発生段階毎に明らかにした。

（1）使用冷冻固定和冷冻替代品观察到人胎儿皮肤中蜂蜜细胞包膜组成蛋白的超细胞定位。使用冷冻固定装置将人类胎儿皮肤切割并快速插入液态丙烷中，并进行冷冻固定。通过该方法获得的每个周的胎儿皮肤保持在超低温度下，并嵌入Lowicryl K11M中，并聚集聚合以制备免疫电子显微镜模块。从这些过程中，制备了超薄切片并与抗人Loricrin，富含脯氨酸的蛋白质，易蛋白酶抗体和胶体标记的二级抗体，然后使用Electal Microspope观察到每个层状细胞的前体蛋白质的超透明蛋白。（2）对观察结果进行全面评估，我们结合了使用免疫组织化学，免疫荧光和后置的免疫电子显微镜的观察结果的观察结果，用于人类胎儿皮肤中的属性细胞包络组成的蛋白在人类发育过程中表达了蜂巢的细胞包膜成分蛋白，并且在每个发育阶段都揭示了人类胎儿皮肤中蜂蜜细胞膜的形成过程。