アンチセンス核酸の表皮角化細胞へのデリバリー法の開発

表皮角质形成细胞反义核酸递送方法的开发

• 批准号: 08772147
• 负责人: 有馬 英俊
• 金额: $ 0.51万
• 依托单位: Tokyo University of Pharmacy and Life Science
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08772147/
• 关键词: アンチセンスDNA; 経皮デリバリー; リポソーム; IL-10

1)ヘアレスマウス皮膚透過性ヘアレスマウス摘出皮膚を用いて,アンチセンスDNAの皮膚移行性におよぼすリポソームの表面電荷の影響を検討したところ,アンチセンスDNA単独では全く皮膚への浸透がみられなかったのに対し,リポソームに封入することにより増大し,特に正電荷リポソームにおいてその効果は顕著であった.また,正電荷リポソームはアンチセンスDNAの皮膚滞溜性を増大することが明らかとなった.したがって,正電荷リポソームはアンチセンスDNAの経皮デリバリー用キャリアーとして優れていることが明らかとなった.2)細胞内取り込みおよびアンチセンス効果最近,アトピー性皮膚炎患者の炎症部位ではTh2系が優位であり,その要因として炎症部位における単球細胞からのIL-10の過剰産生が関与していると報告されている.そこで,培養細胞としてマクロファージ様株化細胞RAW264.7を用いて以下の検討を行った.細胞へのアンチセンスDNAの取り込みは,皮膚移行性と同様に,アンチセンスDNA単独では僅かであったのに対し,正荷電のリポソームにおいて約10倍増大した.また,細胞をLPSで刺激後のIL-10産生におよぼすアンチセンスDNAの影響を検討したところ,IL-10mRNAの3′非翻訳領域に対するものが濃度依存的,配列依存的に顕著に抑制した.しかし,アンチセンスDNAを封入したリポソームではアンチセンス効果の増強は見いだされなかった.今後,アンチセンスDNAとリポソームの配合比率など実験条件を変えてアンチセンス効果におよぼす影響について検討を加えて行く予定である.また,リポソーム封入体がアンチセンスDNAの細胞取り込みを著しく増大するにもかかわらず,効果の増強を示さない要因として,細胞取り込み後,ライソゾーム系へ移行し,ほとんどのアンチセンスDNAがターゲットへ結合する前に,分解している可能性も考えられる.そのため,細胞質内へアンチセンスDNAを直接移行させうるような他のキャリアー等についても今後検討を加えて行く予定である.

1)无毛小鼠的皮肤渗透性当我们使用无毛小鼠的切除皮肤检查脂质体的表面电荷对反义DNA的皮肤渗透性的影响时，我们发现单独的反义DNA根本无法渗透到皮肤上。另一方面，该效果在带正电荷的脂质体中尤其显着，还表明带正电荷的脂质体增加了反义DNA的皮肤保留。 2) 细胞内摄取和反义作用最近发现，特应性皮炎患者的炎症区域以Th2系统为主，该部位的炎症是其中的一个促成因素。据报道，细胞中IL-10的过量产生与此有关。因此，我们使用巨噬细胞样细胞系RAW264.7作为培养细胞进行了以下研究。将反义DNA掺入细胞以及皮肤渗透、抗血清虽然反义 DNA 单独的量很少，但在带正电荷的脂质体中，其量增加了约 10 倍。此外，当我们检查用 LPS 刺激细胞后反义 DNA 对 IL-10 产生的影响时，我们发现 IL-10 在mRNA 的 3' 非翻译区。然而，包裹反义DNA的脂质体并没有发现反义效果的增强。我们将在未来研究实验条件，例如反义DNA和脂质体的混合比例。此外，虽然脂质体包涵体显着增加了反义DNA的细胞摄取，但效果并未增强的原因之一是，溶酶体中的大部分反义DNA有可能在转移到细胞质并与细胞结合之前被降解。因此，未来我们计划进一步研究其他可以将反义DNA转移到细胞质中的载体。