環状オリゴ糖/デンドリマー結合体を基本骨格とする高機能性遺伝子導入ベクターの構築

以环状寡糖/树枝状大分子缀合物为基本骨架的高功能基因转移载体的构建

• 批准号: 12771464
• 负责人: 有馬 英俊
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Kumamoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12771464/
• 关键词: シクロデキストリン; デンドリマー; ガラクトース; 共有結合体; 遺伝子導入; 非ウイルスベクター

ガラクトシルα-シクロデキストリン(Gal-α-CyD)とGeneration 2のポリアミドアミンデンドリマー(デンドリマー)との結合体(Gal-α-CDE)およびα-シクロデキストリン(α-CyD)とガラクトシル化デンドリマーとの結合体(Gal-DE-α-CyD)を新規に調製するため、その合成法・精製法について検討した。また、これら結合体とプラスミドDNA(pDNA)との複合体形成、アシアロ糖蛋白レセプターを発現するヒト肝癌細胞HepG2細胞におけるレポーター遺伝子(ルシフェラーゼ)の発現効率をガラクトース非修飾デンドリマー/α-CyD結合体の場合と比較検討した。Gal-α-CDEは、Gal-α-CyDをトシル化後、DMSO中でデンドリマーと24時間反応させて合成した。一方、Gal-DE-α-CyDはデンドリマーと乳糖をバッファー(pH7.0)中で10日間反応させた後、トシル化α-CyDとDMSO中で24時間反応させて合成した。これら反応物はゲル濾過、アルコール沈殿、アフィニティークロマトグラフィーにより精製した。NMRスペクトルの結果より、結合体はα-CyDとデンドリマーがモル比1:1で結合していることを確認した。電気泳動法で検討した結果、これらα-CyD結合体とpDNAとの複合体形成能はデンドリマーと同様であった。Gal-α-CDE/pDNA複合体のHepG2細胞におけるレポーター遺伝子の発現は、デンドリマー/pDNA複合体と同程度であったが、Gal-DE-α-CyD/pDNA複合体では増大する傾向が観察された。デンドリマー中のGalの置換度を調節することにより、遺伝子導入効率の増大が示唆された。

To newly prepare a conjugate of galactosyl α-cyclodextrin (Gal-α-CyD) with a polyamidoamine dendrimer (dendrimer) of Generation 2 (Gal-α-CDE) and a conjugate of alpha-cyclodextrin (α-CyD) with a galactosylated dendrimer (Gal-DE-α-CyD), the synthesis and purification methods被调查了。此外，将这些结合物与质粒DNA（pDNA）之间形成复合物，以及在人肝癌细胞HEPG2细胞中表达Asialoglycolotein受体的记者基因（荧光素酶）的表达效率与半乳糖糖未固定的树突蛋白甲基甲酸甲酸甲酸酸酯的甲基乳糖糖糖蛋白受体的表达效率。通过甲苯基化gal-α-CYD合成GAL-α-CDE，并将其与DMSO中的树枝状聚合物反应24小时。另一方面，通过在缓冲液中反应树状聚合物和乳糖（pH 7.0）中的乳糖合成GAL-DE-α-CYD 10天，然后与DMSO中的甲基化α-Cyd反应24小时。通过凝胶过滤，酒精沉淀和亲和色谱法纯化了反应。从NMR光谱中，可以证实α-CYD和树枝状聚合物以1：1的摩尔比结合在偶联物中。由于电泳的研究，这些α-Cyd结合物与pDNA的复杂形成能力与树突聚合物的复杂形成能力相似。 GAL-α-CDE/pDNA复合物的HEPG2细胞中报告基因的表达与树枝状聚合物/PDNA复合物的表达相当，但是在Gal-De-de-α-Cyd/pDNA复合物中观察到增加的趋势。调整树状聚合物中GAL的取代程度表明基因转移效率提高。

项目成果

H.Arima: "Contribution of P-Glycoprotein to the Enhancing Effects of Dimethyl-β-cyclodextrin on Oral Bioavailability of Tacrolimus"Journal of Pharmacolgy and Experimental therapeutics. (印刷中). (2001)

H.Arima：“P-糖蛋白对二甲基-β-环糊精对他克莫司口服生物利用度的增强作用的贡献”药理学和实验治疗学杂志（2001 年出版）。

H.Arima: "Enhancement of Gene Expression by Polyamidoamine Dendrimer Conjugates with α-,β- and γ-Cyclodextrins"Bioconjugte Chemistry. (印刷中). (2001)

H.Arima：“聚酰胺胺树状聚合物与 α-、β- 和 γ-环糊精缀合物增强基因表达”生物缀合物化学（出版中）。

H.Arima: "Design of potent Phosphorothioate Antisense Oligonucleotides Designed to Human Interleukin 10 Gene and Their Evaluation of Antisense Activity"Pharmaceutical Research. 16(8). 1163-1171 (1999)

H.Arima：“针对人白细胞介素 10 基因设计的有效硫代磷酸酯反义寡核苷酸的设计及其反义活性的评估”药物研究。