組み換えNF-κBウィルスを用いた神経細胞アポトーシス阻害活性の解析

重组NF-κB病毒对神经元凋亡抑制活性的分析

基本信息

批准号：
12780588
负责人：
浜之上誠
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Toho University (2001)Jikei University School of Medicine (2000)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2002
项目状态：
已结题

项目摘要

我々はこれまで核内転写因子であるNF-κBが、中枢知覚神経細胞のアポトーシス制御活性を持っていることを明らかにしてきた。今年度は神経細胞アポトーシス阻害活性の作用機序の解明の一助として、同じく神経系に存在しアポトーシスが誘導されやすいオリゴデンドロサイトにおける解析を行った。NF-κB遺伝子もしくはIκB-α遺伝子を安定発現するオリゴデンドロサイト前駆細胞株を樹立し、腫瘍壊死因子によりアポトーシスを誘導した結果、ベクターのみを発現させた細胞では約41%の細胞がアポトーシスにより死滅したのに比べ、NF-κBを発現させた細胞株では、死滅した細胞がわずか約11%に減少しており、アポトーシスが強力に阻害されていることを見いだした。このアポトーシス阻害活性は、NF-κBの阻害蛋白であるIκB-αを同時に発現させることによりほぼ完全に消失したことから、NF-κB自体のアポトーシス阻害活性であると考えられた。またさらにこのアポトーシスはカスパーゼ阻害剤では阻害されなかったことから、NF-κBがカスパーゼ非依存性の経路によりアポトーシスを阻害している可能性が示唆され非常に興味深い。以上の結果はこれまで我々が得てきた神経細胞における活性と類似しており、現在、神経細胞とオリゴデンドロサイトの両者において共通に変動している遺伝子およびタンパク質の観点からさらに詳細な解析を続けている。また以上の結果は現在英文国際誌に投稿準備中である。

我们先前已经表明，核转录因子NF-κB在中央感觉神经元中具有细胞凋亡调节活性。今年，我们对神经系统中也存在的少突胶质细胞进行了分析，并且很容易诱导凋亡，这有助于神经元凋亡抑制活性的作用机理。我们建立了稳定表达NF-κB或IκB-α基因的少突胶质细胞前体细胞系，并使用肿瘤坏死因子诱导凋亡。在单独表达载体的细胞中，大约41％的细胞被凋亡杀死，而在表达NF-κB的细胞系中，死细胞的数量降低到仅为11％，我们发现凋亡被极大地抑制。通过同时表达NF-κB抑制性蛋白的IκB-α几乎完全消除了这种凋亡抑制活性，被认为是NF-κB本身的凋亡抑制活性。此外，caspase抑制剂没有抑制这种细胞凋亡，这表明NF-κB可以通过caspase独立的途径抑制凋亡，这非常有趣。以上结果与到目前为止的神经元中获得的活性相似，目前，我们正在继续对神经元和少突胶质细胞中通常变化的基因和蛋白质进行进一步的详细分析。目前，上述结果已准备好接受国际英语杂志。