若齢ＰＤ－１ノックアウトマウスに誘発される自己免疫性肝炎の研究

PD-1敲除幼鼠诱导自身免疫性肝炎的研究

基本信息

批准号：
21H02717
负责人：
石田靖雅
金额：
$ 11.15万
依托单位：
Nara Institute of Science and Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

ENU は、マウスに投与した場合、精子形成細胞や正常体細胞のゲノムに点突然変異を引き起こす。令和3年度にも、生後２ヶ月の野生型 WT マウスと PD-1 KO マウス（ともに遺伝的背景は C57BL/6）を用意し、ENU の投与（85 mg/kg BW）を（1週間の間隔を空けて）二度行った。その後、ENU 投与マウスの主に肝臓に出現する炎症病変を観察し、リンパ球浸潤の程度や肉芽腫性病変の出現頻度が経時的に変化することを確認した。本研究では、DNA 複製後に働くミスマッチ修復（MMR）経路の遺伝子のうち、Msh2 遺伝子のKO マウスを利用して、PD-1 KO マウスの体細胞への変異導入を加速させた。具体的には、PD-1 & Msh2 のダブルノックアウト（DKO）マウスを作製し、肝臓をはじめとする複数の臓器に出現する自己免疫性の病変を病理学的、あるいは免疫組織化学的手法を用いて解析した。しかし、ENU 投与や Msh2 欠失の場合、マウスのゲノムに導入される変異はランダムであり、個々の体細胞ごとにパターンが異なるため、たとえ狙い通り PD-1 KO マウスに自己免疫病態が誘発されたとしても、その原因となった変異を、その他の無数の変異の中から割り出すことは非常に難しい。この問題点を部分的に克服するために、PD-1 KO マウスの肝臓において、既知の非自己タンパク質を発現させる実験も並行させるが、令和3年度には、その準備を開始した。実験手法としては、マウスの尾静脈から Sleeping Beauty (SB) トランスポゾン（外来遺伝子の発現ベクター）とその transposase (SB100X) 発現ベクターを共注入する HTVi 法を活用する。令和3年度には、マウス MHC クラス I 分子（H-2Kd & H-2Kb）を強制発現させるためのベクターを構築した。

当对小鼠施用时，ENU会导致精子发生和正常体细胞基因组中的点突变。在2021年，制备了两个月大的野生型WT小鼠和PD-1 KO小鼠（均来自遗传背景的C57BL/6），并给予ENU两次（85 mg/kg BW）（以一周的间隔）给予ENU。然后，我们观察到主要出现在ENU治疗小鼠的肝脏中的炎性病变，并确认淋巴细胞浸润的程度和肉芽肿病变的频率随时间而变化。在这项研究中，在DNA复制后起作用的不匹配修复（MMR）途径的基因中，MSH2基因的KO小鼠用于将诱变加速到PD-1 KO小鼠中的体细胞中。具体而言，制备了PD-1和MSH2的双基因敲除（DKO）小鼠，并使用病理或免疫组织化学技术分析了包括肝脏在内的多个器官中出现的自身免疫性病变。但是，在ENU给药或MSH2缺失的情况下，引入小鼠基因组中的突变是随机的，并且每个单个体细胞的模式都不同，因此，即使在预期的PD-1 KO小鼠中诱导了自身免疫性病理学，也很难识别导致它们在其他突变中引起它们的突变。 To overcome this problem in part, experiments to express known non-self proteins in the livers of PD-1 KO mice will be conducted in parallel, but preparations have begun in 2021. An experimental technique involves co-injecting a Sleeping Beauty (SB) transposon (expressing vector for foreign genes) and its transposase (SB100X) expression vector from the tail vein of mice.在2021年，构建向量以强行表达小鼠MHC I类分子（H-2KD和H-2KB）。

项目成果

期刊论文数量（2）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

PD-1 とがん、T 細胞による自己と非自己の識別

PD-1和癌症，T细胞区分自身和非自身

DOI：
发表时间：
2022
期刊：
影响因子：
0
作者：
相澤風花;梶本春奈;森山大嗣;岡林亜美;合田光寛;濱野裕章;八木健太;石澤有紀;座間味義人;石澤啓介;山本靖彦;石田靖雅
通讯作者：
石田靖雅

PD-1 is required for the suppressiion of inflammatory responses in aged mice

PD-1 是抑制老年小鼠炎症反应所必需的

DOI：
发表时间：
2022
期刊：
影响因子：
0
作者：
Morita Masashi;Toida Ai;Horiuchi Yuki;Watanabe Shiro;Sasahara Masakiyo;Kawaguchi Kosuke;So Takanori;Imanaka Tsuneo;Yoshiro Osaki and Yasumasa Ishida
通讯作者：
Yoshiro Osaki and Yasumasa Ishida