ジーントラップ・マイクロアレイを利用した感染宿主応答の分子遺伝学的解析

使用基因捕获微阵列对受感染宿主反应进行分子遗传学分析

基本信息

批准号：
16017263
负责人：
石田靖雅
金额：
$ 6.4万
依托单位：
Nara Institute of Science and Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では、病原微生物や悪性新生物に対する有効な免疫応答を引き起こし、かつ自己成分に対する免疫寛容の維持においても極めて重要な役割を果たしていると考えられるようになった樹状細胞(dendritic cells, DCs)に対し、ゲノム科学の新しい手法を用いた網羅的な解析を行っている。我々は、新たに開発した手法「UPATrap」を利用してnonsense-mediated mRNA decay(NMD)と呼ばれるmRNAサーベイランス機構を抑制すれば、標的細胞(この場合はマウスのES細胞)中で発現していない遺伝子(免疫系遺伝子の多くはこのグループに属する)の機能を、ランダムかつ確実に破壊することができる、という事実を見出した。我々が開発した新手法は、2004年9月に提唱された「The Knockout Mouse Project」(遺伝子トラップと遺伝子ターゲティングの手法を組み合わせ、マウスES細胞中の全遺伝子を今後5年以内に破壊する、という壮大なプロジェクト)の遂行にとり、大きな障害となっているステップを乗り越えるのに役立つと考えられる。平成17年度は、この「UPATrap」法により、マウスES細胞中の内在性遺伝子スペクトラムとベクター挿入部位の両者に「偏り」が存在しない理想的な遺伝子トラップを行い、トラップされた遺伝子断片を用いてマイクロアレイを作製した。このマイクロアレイを用い、パイロット実験としてマウスの免疫担当細胞やリンパ組織で特異的に発現されている新規遺伝子を探索したところ、マウス胸腺のCD4-8-細胞とCD4+8+細胞のみに限局して発現されるmRNA-like non-coding遺伝子がトラップされたES細胞クローン8v3-033を見出すことに成功した。現在、このクローンを用い、ノックアウト・マウスの作製を進めている。

这项研究使用一种新的基因组科学方法来对树突细胞（DC）进行全面分析，这些方法被认为会引发针对病原微生物和恶性肿瘤的有效免疫反应，并维持对自我竞争力的免疫耐受性。我们发现，通过使用新开发的方法“ UPATRAP”来抑制称为无义介导的mRNA衰变（NMD）的mRNA监视机制，可以随机且可靠地破坏未表达的基因的功能（在这种情况下，在这种情况下，属于该组的许多免疫系统基因）。我们开发的新方法将帮助我们克服执行“淘汰小鼠项目”的主要障碍，这是一个结合基因捕获和基因靶向技术的宏伟项目，以在未来五年内破坏小鼠ES细胞中的所有基因。在2005年，使用这种“ UPATRAP”方法，我们进行了理想的基因捕获，在内源基因谱和小鼠ES细胞中的矢量插入位点都不存在，并使用捕获的基因片段创建了微阵列。使用此微阵列，我们搜索了在小鼠免疫细胞和淋巴组织中特异性表达的新基因作为试验实验，并成功地发现了ES细胞克隆8V3-033，该克隆8V3-033被捕获的mRNA样非编码基因，该基因仅定位于CD4-8-8-和CD4+ 8+ 8+细胞中的小鼠小鼠Thymus中的CD4-8-8-和CD4+ 8+细胞。目前，我们正在使用此克隆来准备淘汰小鼠。